组蛋白甲基转移酶ASH1L在牛卵丘细胞及胚胎中的表达和功能
发布时间：2023-04-01 19:18
在哺乳动物中,表观遗传修饰对细胞增殖和胚胎的发育具有重要的调控作用,其中组蛋白的甲基化及乙酰化可改变染色体的构象,调控基因的表达与沉默,进而调节个体的发育。缺失的、小的、同源异形蛋白1(Absent small or homeotic 1,ASH1L)是一种组蛋白甲基转移酶,可通过甲基化H3K36、拮抗多梳蛋白的表达进而促进个体的生长与发育。本文研究ASH1L甲基转移酶在牛卵丘细胞及胚胎中的表达和功能,为进一步揭示其对胚胎的调控机制提供技术和理论基础。试验一:为探究ASH1L甲基转移酶在牛卵丘细胞中的表达与功能,对细胞中ASH1L表达进行检测。结果显示,ASH1L位于牛卵丘细胞的细胞核中,呈点状分布。成功筛选到能有效干扰牛Ash1L基因的siRNA-2,其干扰效率为6070%。将siRNA-2转染卵丘细胞后,该干扰组细胞中H3K36me1/2/3三种甲基化水平均显著低于对照组(P<0.05);干扰Ash1L导致凋亡细胞数增多、凋亡相关基因Bax、Bcl-2及caspase-3表达水平显著上调,凋亡基因Bax和caspase-3表达量高于抗凋亡相关基因Bcl-...
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
1.1 表观遗传修饰
1.1.1 DNA甲基化
1.1.2 组蛋白修饰
1.2 PRC2蛋白
1.3 三胸腔结构蛋白质组(TrxG)
1.4 组蛋白甲基转移酶ASH1L
1.4.1 ASH1L甲基转移酶的晶体结构
1.4.2 ASH1L甲基转移酶功能
1.5 研究目的与意义
第二章 ASH1L甲基转移酶在牛卵丘细胞中的表达与功能研究
2.1 试验材料
2.1.1 材料
2.1.2 设备及耗材
2.1.3 主要溶液及其配制
2.2 试验方法
2.2.1 牛卵丘细胞培养
2.2.2 siRNA的设计与合成
2.2.3 牛卵丘细胞的转染
2.2.4 实时荧光定量PCR
2.2.5 牛卵丘细胞的免疫荧光染色
2.2.6 蛋白质免疫印迹
2.2.7 数据分析
2.3 结果与分析
2.3.1 牛卵丘细胞的培养
2.3.2 Ash1L基因及其蛋白在牛卵丘细胞中的表达
2.3.3 牛卵丘细胞的H3K36甲基化修饰状态
2.3.4 牛Ash1L基因有效si RNA序列的筛选及干扰效率检测
2.3.5 干扰Ash1L基因对牛卵丘细胞中H3K36 甲基化状态的影响
2.3.6 干扰Ash1L基因对细胞凋亡的影响
2.3.7 干扰Ash1L基因对凋亡相关基因表达的影响
2.3.8 干扰Ash1L基因对PRC2 蛋白基因表达的影响
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 ASH1L甲基转移酶在牛体外受精胚胎中的表达及功能研究
3.1 试验材料
3.1.1 材料
3.1.2 设备及耗材
3.1.3 主要溶液及其配制
3.2 试验方法
3.2.1 牛早期胚胎的制备
3.2.2 牛早期胚胎siRNA注射
3.2.3 引物设计与荧光定量PCR
3.2.4 免疫荧光染色
3.2.5 数据分析
3.3 结果与分析
3.3.1 Ash1L基因及其蛋白在牛卵母细胞及早期胚胎中的表达
3.3.2 牛卵母细胞及早期胚胎中H3K36甲基化修饰状态
3.3.3 牛胚胎中Ash1L siRNA干扰效果的验证
3.3.4 干扰Ash1L基因对牛早期胚胎发育的影响
3.3.5 干扰Ash1L基因对囊胚质量的影响
3.3.6 干扰Ash1L基因对牛早期胚胎多能性基因表达水平的影响
3.3.7 干扰Ash1L基因对PRC2 蛋白亚基基因的影响
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 牛ASH1L甲基转移酶靶基因的预测
4.1 试验材料
4.1.1 材料
4.1.2 设备及耗材
4.2 试验方法
4.2.1 RNA提取
4.2.2 建库测序
4.2.3 数据质量预处理及分析
4.2.4 引物设计与荧光定量PCR
4.3 结果与分析
4.3.1 测序数据质量统计与检测
4.3.2 参考基因组比对
4.3.3 干扰组与对照组相关性检验
4.3.4 两组之间差异基因可视化分析
4.3.5 差异基因的GO注释及KEGG分析
4.3.6 干扰组与对照组间差异基因表达
4.3.7 差异表达基因RT-qPCR验证
4.4 讨论
4.5 小结
第五章 结论
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3777712
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
1.1 表观遗传修饰
1.1.1 DNA甲基化
1.1.2 组蛋白修饰
1.2 PRC2蛋白
1.3 三胸腔结构蛋白质组(TrxG)
1.4 组蛋白甲基转移酶ASH1L
1.4.1 ASH1L甲基转移酶的晶体结构
1.4.2 ASH1L甲基转移酶功能
1.5 研究目的与意义
第二章 ASH1L甲基转移酶在牛卵丘细胞中的表达与功能研究
2.1 试验材料
2.1.1 材料
2.1.2 设备及耗材
2.1.3 主要溶液及其配制
2.2 试验方法
2.2.1 牛卵丘细胞培养
2.2.2 siRNA的设计与合成
2.2.3 牛卵丘细胞的转染
2.2.4 实时荧光定量PCR
2.2.5 牛卵丘细胞的免疫荧光染色
2.2.6 蛋白质免疫印迹
2.2.7 数据分析
2.3 结果与分析
2.3.1 牛卵丘细胞的培养
2.3.2 Ash1L基因及其蛋白在牛卵丘细胞中的表达
2.3.3 牛卵丘细胞的H3K36甲基化修饰状态
2.3.4 牛Ash1L基因有效si RNA序列的筛选及干扰效率检测
2.3.5 干扰Ash1L基因对牛卵丘细胞中H3K36 甲基化状态的影响
2.3.6 干扰Ash1L基因对细胞凋亡的影响
2.3.7 干扰Ash1L基因对凋亡相关基因表达的影响
2.3.8 干扰Ash1L基因对PRC2 蛋白基因表达的影响
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 ASH1L甲基转移酶在牛体外受精胚胎中的表达及功能研究
3.1 试验材料
3.1.1 材料
3.1.2 设备及耗材
3.1.3 主要溶液及其配制
3.2 试验方法
3.2.1 牛早期胚胎的制备
3.2.2 牛早期胚胎siRNA注射
3.2.3 引物设计与荧光定量PCR
3.2.4 免疫荧光染色
3.2.5 数据分析
3.3 结果与分析
3.3.1 Ash1L基因及其蛋白在牛卵母细胞及早期胚胎中的表达
3.3.2 牛卵母细胞及早期胚胎中H3K36甲基化修饰状态
3.3.3 牛胚胎中Ash1L siRNA干扰效果的验证
3.3.4 干扰Ash1L基因对牛早期胚胎发育的影响
3.3.5 干扰Ash1L基因对囊胚质量的影响
3.3.6 干扰Ash1L基因对牛早期胚胎多能性基因表达水平的影响
3.3.7 干扰Ash1L基因对PRC2 蛋白亚基基因的影响
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 牛ASH1L甲基转移酶靶基因的预测
4.1 试验材料
4.1.1 材料
4.1.2 设备及耗材
4.2 试验方法
4.2.1 RNA提取
4.2.2 建库测序
4.2.3 数据质量预处理及分析
4.2.4 引物设计与荧光定量PCR
4.3 结果与分析
4.3.1 测序数据质量统计与检测
4.3.2 参考基因组比对
4.3.3 干扰组与对照组相关性检验
4.3.4 两组之间差异基因可视化分析
4.3.5 差异基因的GO注释及KEGG分析
4.3.6 干扰组与对照组间差异基因表达
4.3.7 差异表达基因RT-qPCR验证
4.4 讨论
4.5 小结
第五章 结论
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3777712
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