肠小体感染猪传染性胃肠炎病毒模型的建立

发布时间：2023-04-01 23:34

　　来源于肠隐窝干细胞的肠小体能模拟体内肠上皮复杂的生理特性,已成为研究宿主与肠道病原相互作用的理想的体外细胞模型。为探究肠小体能否作为猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染模型,本研究从仔猪的回肠组织分离培养隐窝干细胞,在培养第7 d后能形成具有隐窝-绒毛样结构的肠小体。分别采用MOI 1、0.1和0.01 TGEV感染肠小体后,通过荧光定量PCR(qPCR)方法检测TGEV在肠小体中的复制情况,结果显示肠小体支持TGEV复制;进一步用MOI 1 TGEV感染肠小体后,通过qPCR检测并绘制TGEV在肠小体中的病毒复制曲线,结果显示,与2 hpi相比,在12 hpi病毒的mRNA转录水平增加了321倍,在24 hpi病毒复制达到峰值;通过间接免疫荧光(IFA)检测TGEV N蛋白的表达,结果显示N蛋白的表达情况与上述mRNA检测结果相符。通过双荧光标记IFA检测TGEV N蛋白与肠上皮细胞类型标志物的共定位情况,结果显示TGEV能感染多种肠上皮细胞类型,包括肠细胞、干细胞和杯状细胞。此外,通过qPCR检测TGEV感染肠小体的干扰素(IFN)mRNA转录水平,结果显示TGEV感染肠小体能显著增...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要实验材料
    1.2猪3D肠小体的分离培养及2D肠小体的培养
    1.3 不同剂量TGEV感染肠小体的荧光定量PCR(q PCR）检测
    1.4 TGEV感染肠小体的病毒复制曲线测定
    1.5 TGEV感染肠小体的间接免疫荧光（IFA）检测
    1.6 TGEV感染肠上皮细胞类型的双荧光标记IFA检测
    1.7 TGEV感染肠小体诱导IFN产生的q PCR检测
2 结果
    2.1 猪肠小体的分离与培养
    2.2 TGEV感染肠小体的病毒复制检测结果
    2.3 双荧光标记IFA检测TGEV感染肠上皮细胞类型的结果
    2.4 TGEV感染肠小体诱导IFN产生的检测结果
3 讨论



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