禽源大肠杆菌的分离鉴定，耐药性分析及联合药敏试验的研究

发布时间：2023-04-02 01:19

　　世界卫生组织称全世界大约有一半抗菌药物用于农场，其中，大多数以亚治疗剂量添加于食品和动物饲料中，以此来达到预防疾病或是促生长的目的。抗菌药物长期、广泛的不合理使用及抗菌药物选择压力等原因，使大肠杆菌耐药株不断增加、耐药谱不断扩大及多重耐药株的大量出现，耐药性的产生给防治疾病带来了严重的问题，抗菌药物在选择压力下，产生耐药性，使得耐药细菌的种类和数量增加，且将耐药基因传其后代，形成“耐药菌库”。因此，减少细菌的耐药性，已成为人们关注的焦点。着眼目前养殖行业的实际发展情况，合理用药是目前最适合的方法。其中联合用药被认为是解决防止细菌耐药性产生的有效方法。 因此，积极开展大肠杆菌耐药性监测，将有利于遏制大肠杆菌耐药性发生发展，优化抗菌药物的合理使用，通过联合用药有助于防治大肠杆菌病。 本文采集了山东部分地区病禽的病料，经细菌的分离纯化，运用细菌培养特性试验、生化试验等方法鉴定临床分离菌株79株。其中致病性大肠杆菌55株，通过WHO推荐的Kirby-Bauer(K-B)法测定79株菌株对18种抗菌药物的耐药性，采用微量肉汤稀释法测定痢菌净、头孢噻肟钠、左氟沙星、氟苯尼考、新霉素、阿奇霉素、粘杆...

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

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符号及缩略词
目录
中文摘要
Abstract
前言
    1.1 大肠杆菌的抗原及毒力因子
    1.2 大肠杆菌的培养特性及生化特点
        1.2.1 大肠杆菌的生长培养特性
        1.2.2 生化反应特点
    1.3 大肠杆菌的致病性
    1.4 大肠杆菌的检测方法
    1.5 大肠杆菌耐药性
        1.5.1 耐药性的产生
        1.5.2 耐药性产生的遗传机制
        1.5.3 大肠杆菌耐药性的现状及耐药性的检测意义
            1.5.3.1 检测方法
            1.5.3.2 近年来大肠埃希氏菌药敏试验情况
    1.6 体外联合药敏试验
        1.6.1 体外联合药敏试验的意义和目的
        1.6.2 体外联合药敏试验的方法
        1.6.3 体外联合药敏试验中各种药物的介绍
            1.6.3.1 喹诺酮类
            1.6.3.2 头孢类
            1.6.3.3 氨基糖苷类
            1.6.3.4 四环素类抗生素
            1.6.3.5 酰胺醇类抗生素
            1.6.3.6 大环内酯类抗生素
            1.6.3.7 多肽类抗生素
            1.6.3.8 喹噁林类
        1.6.4 抗菌药物联合应用的理论依据
        1.6.5 联合用药的适应症
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 试剂及其他用品
        2.1.3 抗菌药物
        2.1.4 主要试剂及培养基的配制
        2.1.5 主要仪器与设备
    2.2 试验方法
        2.2.1 大肠杆菌的分离
            2.2.1.1 大肠杆菌的样本采集
            2.2.1.2 大肠杆菌的分离培养
        2.2.2 大肠杆菌的鉴定
            2.2.2.1 革兰氏染色、镜检
            2.2.2.2 生化鉴定
            2.2.2.3 致病性试验
            2.2.2.4 大肠杆菌的保存
        2.2.3 药敏试验
        2.2.4 分子鉴定试验
            2.2.4.1 设计引物
            2.2.4.2 PCR 产物的纯化回收
            2.2.4.3 目的基因的连接转化及鉴定
            2.2.4.4 大肠杆菌感受态细胞（E.coli DH5α）的制备
            2.2.4.5 连接产物转化
            2.2.4.6 重组质粒 DNA 的提取
            2.2.4.7 重组质粒的鉴定
            2.2.4.8 阳性克隆序列的测序及结果分析
        2.2.5 联合药敏试验的研究
            2.2.5.1 抗菌药物储备液配制
            2.2.5.2 大肠杆菌对数生长期的测定
            2.2.5.3 细菌悬液的制备
            2.2.5.4 最小抑菌浓度的测定
            2.2.5.5 八种抗生素两两组合的联合药敏试验
            2.2.5.6 具体操作
3 结果与分析
    3.1 分离鉴定（镜检、生化试验、培养结果）
    3.2 药敏试验结果
    3.3 联合药敏试验结果
        3.3.1 八种抗菌药物对选取的 12 株大肠杆菌最小抑菌浓度 MIC 的测定
        3.3.2 体外联合药敏试验研究结果
            3.3.2.1 八种抗菌药物对标准株大肠杆菌 ATCC25922 的体外联合试验的结果
            3.3.2.2 八种抗菌药物两两组合分别对 12 株临床分离株大肠杆菌的体外联合试验的结果
    3.4 联合药敏药物疗效动物试验
4 讨论
    4.1 大肠杆菌耐药性讨论
    4.2 防治措施
    4.3 联合药敏试验的研究讨论
    4.4 注意理论和临床的差异
    4.5 影响结果的因素
5 结论
参考文献
致谢



本文编号：3778238