鸡γ干扰素与补体C3d主要片段的串联表达及活性测定

发布时间：2023-04-03 21:51

　　目的:本研究将干扰素和补体C3d主要片段进行串联表达,以研究共同刺激细胞的活性,观察它们的免疫佐剂效应,以期获得一种更高效的免疫佐剂。方法:本实验合成了chIFN-γ、chIFN-γ-C3d基因,利用pET29a(+)构建重组载体,并在大肠杆菌BL21中进行诱导表达。将重组蛋白纯化后进行鸡胚内抗新城疫病毒活性研究;并与DNA疫苗共同免疫雏鸡,HI法测定抗体水平,MTT法测定淋巴细胞增殖情况,并分析免疫器官指数变化。结果:成功表达纯化了chIFN-γ和chIFN-γ-C3d两个蛋白,SDS-PAGE电泳检测分子量分别约为17 kD和21 kD,His标签抗体检测表明蛋白表达正确。鸡胚内抗病毒活性测定表明一定浓度的chIFN-γ和chIFN-γ-C3d均可以抑制新城疫病毒的增殖,低浓度时chIFN-γ-C3d抗病毒活性高于chIFN-γ;与DNA疫苗联合免疫后,HA组、γ+HA和γ+C+HA组抗体水平持续升高,且与HA组相比,γ+C+HA组抗体水平更高,差异有极显著统计学意义(P<0.01)。第7周开始γ+C+HA组的抗体水平均高于γ+HA组,差异有极显著统计学意义(P<0.0...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 目的基因的设计合成
        1.2.2 融合蛋白诱导表达
        1.2.3 鸡胚内抗病毒活性测定
        1.2.4 免疫佐剂效应测定
2 结果
    2.1 重组载体的双酶切及测序鉴定结果
    2.2 重组蛋白表达检测和Western blot鉴定
    2.3 重组蛋白chIFN-γ-C3d表达条件的优化
    2.4 鸡胚内抗病毒活性测定结果
    2.5 鸡体内HI抗体水平检测结果
    2.6 鸡淋巴细胞MTT检测结果
    2.7 鸡免疫器官增长指数测定结果
3 讨论



本文编号：3781208