鹿茸四区段mRNA-microRNA表达谱测定、分析及蜡片区调控网络构建

发布时间：2023-04-05 10:55

　　鹿茸是指鹿科动物头部衍生的未骨化密生茸毛的幼角,是自然界惟一能够周期性完全再生的哺乳动物骨质附属器官,其组织学研究表明,从上到下呈现出完整的间充质增殖分化为软骨,软骨被松质骨替换,松质骨重塑为密质骨的过程,中国药典规定梅花鹿和马鹿鹿茸为我国传统中药,被誉为动物药之首。鹿茸不同组织结构中粗蛋白、氨基酸、水溶性多糖、单糖、脂肪酸等物质含量不同,传统上鹿茸多以分区段出售,区段的划分是根据鹿茸的内、外部的形态学和组织学特点从上到下分为蜡片区(wax-like,WL)、粉片区(blood-color,BC)、蜂片区(honeycomb-like,HL)和骨片区(bone slice,B),但是该分类缺乏分子水平方面的支撑。本研究旨在通过构建鹿茸四区段的mRNA和microRNA(miRNA)的分子表达谱,找到不同差异的mRNA和miRNA,在分子水平上对鹿茸传统的分区进行再确认。在此基础上,鹿茸WL区段涵盖生长中心,通过差异分析的方法,找到WL区段与其他区段的差异基因,构建mRNAmiRNA的调控网络,并利用qRT-PCR和CCK8检测对关键基因进行功能验证,为研究鹿茸的快速生长问题提供依据。通...

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 鹿茸概述
    1.2 鹿茸商业分区
    1.3 鹿茸转录组的研究
        1.3.1 鹿茸顶端不同发育时期转录组
        1.3.2 鹿茸顶端分层组织转录组
    1.4 鹿茸生长发育关键调控因子的功能研究
    1.5 研究内容、目的和意义
第二章 鹿茸四区段mRNA组学研究
    2.1 材料与方法
        2.1.1 鹿茸四区段样品采集
        2.1.2 总RNA的提取
        2.1.3 总RNA质量评测
        2.1.4 测序文库的构建
        2.1.5 测序数据过滤
        2.1.6 参考序列比对分析
        2.1.7 序列的组装注释定量
        2.1.8 差异表达分析
        2.1.9 聚类分析
        2.1.10 GO显著性富集分析
        2.1.11 mRNA荧光定量PCR验证
    2.2 结果与分析
        2.2.1 高质量测序数据
        2.2.2 多元统计分析鉴定鹿茸分区
        2.2.3 鹿茸各区段差异表达的mRNAs
        2.2.4 差异基因GO功能注释
        2.2.5 mRNA荧光定量PCR验证
        2.2.6 鹿茸各区段相对高表达的mRNAs
        2.2.7 各区段相对高表达mRNAs的功能分析
    2.3 讨论
    2.4 本章小结
第三章 鹿茸四区段micro RNA组学研究
    3.1 材料与方法
        3.1.1 鹿茸样品采集
        3.1.2 micro RNA的提取
        3.1.3 miRNA文库构建和上机测序
        3.1.4 测序数据过滤
        3.1.5 miRNAs比对、注释及差异表达
        3.1.6 靶基因的预测
        3.1.7 聚类分析
        3.1.8 GO显著性富集分析
        3.1.9 miRNA荧光定量PCR验证
    3.2 结果与分析
        3.2.1 高质量测序数据
        3.2.2 miRNA的长度分布图
        3.2.3 多元统计分析鉴定鹿茸分区
        3.2.4 鹿茸各区段差异表达miRNAs
        3.2.5 差异miRNAs靶基因及功能注释
        3.2.6 miRNA荧光定量PCR验证
        3.2.7 鹿茸各区段相对高表达的miRNA
        3.2.8 各区段相对高表达miRNAs靶基因及功能分析
    3.3 讨论
    3.4 本章小结
第四章 鹿茸蜡片区间充质层基因调控网络研究
    4.1 材料与方法
        4.1.1 mRNA-miRNA互作网络构建
        4.1.2 鹿茸蜡片区间充质层细胞的采集与培养
        4.1.3 miRNA模拟物转染
        4.1.4 CCK8法检测细胞增殖能力
        4.1.5 数据分析
    4.2 结果与分析
        4.2.1 mRNA-miRNA互作网络的构建
        4.2.2 鹿茸蜡片区间充质层基因调控网络的功能富集
        4.2.3 miR-155 及其靶基因FOXO3 的功能验证
    4.3 讨论
    4.4 本章小结
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3783285