靶向鸭瘟病毒ICP4基因的microRNA功能初探

发布时间：2023-04-07 00:06

　　鸭瘟病毒(duck plague virus,DPV)属疱疹病毒科(herpesvirales)α疱疹病毒亚科(Alphaherpesvirinae),可引起禽类急性败血症,对世界各国水禽业具有严重危害性。疱疹病毒micro RNA(mi RNA)的数量占病毒mi RNA总数的90%以上,其多数成员编码的mi RNA研究已有较大进展,但关于鸭瘟病毒mi RNA的研究报道甚少。本研究以对病毒复制具有重要调控作用的立即早期基因ICP4为目的基因,结合实验室测序获得的CHv株编码的39个鸭瘟病毒mi RNA,筛选出靶向病毒ICP4基因的mi RNA,并对其功能进行了初步研究,结果如下:1靶向鸭瘟病毒ICP4基因的mi RNA筛选预测结果显示,mi R-D22-3p、mi R-D22-5p及mi R-D23-5p均完全互补于ICP4基因,本试验选择由同一前体分化的mi R-D22-3p及mi R-D22-5p为筛选对象。将mi R-D22-5p mimics和NC mimics分别与荧光质粒pmir GLO-ICP4-WT及pmir GLO-ICP4-MUT5p共转染COS7细胞。结果表明,与...

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摘要
ABSTRACT
缩略语表(Abbreviations)
第一章 文献综述
    1 miRNA的研究
        1.1 miRNA生源途径
        1.2 miRNA的调控途径
            1.2.1 参与翻译抑制
            1.2.2 参与降解mRNA
    2 禽疱疹病毒miRNA的研究
    3 疱疹病毒ICP4基因的研究
    4 研究目的与意义
第二章 试验研究
    1 材料
        1.1 毒株、质粒和细胞等
        1.2 主要试剂及其配制
        1.3 主要仪器
    2 试验方法
        2.1 靶向鸭瘟病毒ICP4基因的miRNA的筛选
            2.1.1 在线预测靶向鸭瘟病毒ICP4基因的miRNA
            2.1.2 双荧光报告基因载体野生型及突变型的构建
            2.1.3 转染
            2.1.4 荧光检测
        2.2 miR-D22-5p对鸭瘟病毒ICP4基因表达的影响
            2.2.1 荧光质粒表达的检测
            2.2.2 RT-qPCR检测ICP4基因mRNA的表达
            2.2.3 miR-D22-5p对鸭瘟病毒ICP4基因蛋白表达的影响
        2.3 miR-D22-5p对鸭瘟病毒增殖的影响
            2.3.1 鸭瘟病毒液TCID50及病毒粒子拷贝数的检测
            2.3.2 qPCR检测不同时间点miRNA对鸭瘟病毒DNA拷贝数的影响
            2.3.3 qPCR不同浓度miRNA对鸭瘟病毒DNA拷贝数的影响
    3 结果
        3.1 靶向鸭瘟ICP4基因的miRNA筛选及验证
            3.1.1 在线预测靶向鸭瘟ICP4基因的候选miRNA
            3.1.2 双荧光报告基因载体野生型及突变型的构建
            3.1.3 荧光检测
        3.2 miR-D22-5p对鸭瘟病毒ICP4基因表达的影响
            3.2.1 荧光质粒表达的检测
            3.2.2 miR-D22-5p对鸭瘟病毒ICP4基因mRNA表达的影响
            3.2.3 miR-D22-5p对鸭瘟病毒ICP4基因蛋白表达的影响
        3.3 miR-D22-5p对鸭瘟病毒增殖的影响
            3.3.1 鸭瘟病毒液TCID50及病毒粒子拷贝数
            3.3.2 不同时间点miRNA对鸭瘟病毒DNA拷贝数的影响
            3.3.3 不同浓度miRNA对鸭瘟病毒DNA拷贝数的影响
    4 讨论
总结
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3784684