口蹄疫病毒结构蛋白VP1病毒样颗粒构建及免疫研究

发布时间：2023-04-09 01:10

　　口蹄疫病毒(FMDV)是小RNA病毒科(Picornaviridae)口疮病毒属(Aphthovirus)的成员，引起的口蹄疫(foot-and-mouth disease, FMD)是一种急性、烈性、高度传染性的病毒病，主要感染牛、羊、猪、鹿等偶蹄类动物。本病除了直接引起幼畜死亡、减少动物体重和产奶量，还导致全球范围内动物及动物产品的国际贸易限制，造成严重的经济损失，是对偶蹄动物威胁最大的传染病。目前广泛使用的全病毒灭活疫苗在应用过程中发现诸多不足，开发新型疫苗来弥补这些不足显得极为迫切。FMDV结构蛋白VP1上存在重要的B细胞和T细胞表位参与构成主要抗原位点。故本研究构建了基于VP1的融合蛋白病毒样颗粒(VLPs)，来研究该融合VLPs的组装情况及免疫效果。 本研究根据FMDV Asia1/JS/CHA/05序列和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)流行株BVDV JZ05-1序列，选择BVDV核心蛋白P14，第169²70位氨基酸和FMDV结构蛋白VP1的第1²11位氨基酸，两者之间设计柔性肽SGSPSGPGSG连接，通过融合PCR获取P14-...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略词表
第1章 引言
    1.1 口蹄疫病毒研究概况
        1.1.1 病毒结构及理化特性
        1.1.2 病毒基因组结构及其功能
        1.1.3 病毒结构蛋白的结构及功能
        1.1.4 病毒抗原位点
    1.2 口蹄疫疫苗研究概况
        1.2.1 灭活疫苗
        1.2.2 弱毒疫苗
        1.2.3 合成肽疫苗
        1.2.4 亚单位疫苗
        1.2.5 活载体疫苗
        1.2.6 核酸疫苗
    1.3 重组 VLP 疫苗研究概况
    1.4 牛病毒性腹泻病毒结构简述
    1.5 研究的目的和意义
第2章 P14-VP1 融合蛋白在枯草芽孢杆菌中的表达
    2.1 材料
        2.1.1 菌株和质粒
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 引物设计与合成
    2.2 方法
        2.2.1 P14-柔性肽-VP1 编码序列的获取
        2.2.2 穿梭表达质粒的构建
        2.2.3 融合蛋白的表达
    2.3 结果
        2.3.1 P14-柔性肽-VP1 编码序列的获取
        2.3.2 穿梭表达质粒的构建
        2.3.3 融合蛋白的表达
        2.3.4 VLPs 的透射电镜检测
    2.4 讨论
        2.4.1 FMDV 融合 VLPs 疫苗的研究趋势
        2.4.2 抗原蛋白与载体蛋白的选择
        2.4.3 表达系统的选择
第3章 P14-VP1 融合 VLPs 免疫原性研究
    3.1 材料
        3.1.1 细胞、试剂与实验动物
        3.1.2 主要仪器
    3.2 方法
        3.2.1 重组 VLPs 免疫小鼠
        3.2.2 免疫小鼠抗体检测
    3.3 结果
        3.3.1 P14-VP1 融合蛋白 VLPs 诱导产生的 IgG 抗体
        3.3.2 P14-VP1 融合蛋白 VLPs 诱导产生的中和抗体
    3.4 讨论
        3.4.1 VLPs 诱导产生的免疫强度和持续时间
        3.4.2 VLPs 诱导的抗体特异性
第4章 结论
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3786794