PDCoV-PEDV二联灭活疫苗的初步研制及对小鼠的免疫原性研究

发布时间：2023-04-11 18:21

　　猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的猪流行性腹泻是一种以呕吐、水样腹泻和脱水为特征的急性接触性肠道传染病,是严重制约养猪业发展的主要病毒性传染病之一。2010年以来,PEDV在我国各地猪群中大规模爆发,市场上以CV777毒株为抗原制备的疫苗免疫后效果并不理想,接种过该疫苗的猪场仍有此病的发生。除了饲养管理因素外,地方流行毒株的变异也可能是导致免疫失败的一个重要原因。2012年,猪丁型冠状病毒(Porcine deltaconoravirus,PDCoV)首次被我国香港学者发现,随后各省份也出现相关报道。PDCoV与PEDV同属冠状病毒,临床症状极相似,目前尚未有针对PDCoV的商品化疫苗出现。本研究基于PEDV和PDCoV河北分离株,试制猪丁型冠状病毒、猪流行性腹泻病毒二联灭活疫苗,同时接种Balb/c小鼠研究免疫原性。具体研究内容如下:为了提高灭活疫苗中抗原含量,本研究对PEDV和PDCoV的体外培养条件进行优化,分别从最佳病毒接种剂量、病毒吸附后维持液用量和最佳收毒时间三个方面进行探索。实验结果发现PEDV HB-HS株...

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【文章目录】：
摘要 abstract 缩写词表 1 引言
1.1 猪流行性腹泻病毒概述
    1.1.1 猪流行性腹泻概述
    1.1.2 PEDV生物学特性
    1.1.3 PEDV的培养特性
    1.1.4 PEDV流行病学
    1.1.5 PEDV的检测方法
    1.1.6 PEDV疫苗的研究进展
1.2 猪丁型冠状病毒及其研究概述
    1.2.1 猪丁型冠状病毒概述
    1.2.2 PDCoV生物学特性
    1.2.3 PDCoV培养特性
    1.2.4 PDCoV流行病学
    1.2.5 PDCoV的检测方法
    1.2.6 PDCoV疫苗的研究进展
1.3 多联疫苗的研究进展和应用
1.4 研究目的及意义 2 材料与方法
2.1 材料
    2.1.1 病毒、细胞系、菌株、疫苗
    2.1.2 主要试剂和耗材
    2.1.3 主要实验仪器
    2.1.4 主要试剂和培养基的配置
    2.1.5 实验动物
2.2 方法
    2.2.1 猪丁型冠状病毒和猪流行性腹泻病毒培养条件的确定
    2.2.2 猪丁型冠状病毒和流行性腹泻病毒液的制备
    2.2.3 细胞毒的鉴定
    2.2.4 猪丁型冠状病毒和猪流行性腹泻病毒TCID50 的测定
    2.2.5 疫苗的制备
    2.2.6 疫苗的检验
    2.2.7 疫苗免疫原性检测方法的建立
    2.2.8 猪丁型冠状病毒-猪流行性腹泻病毒二联灭活疫苗小鼠免疫实验 3 结果
3.1 猪丁型冠状病毒和猪流行性腹泻病毒培养条件
3.2 PDCoV和 PEDV的增殖曲线和最佳收毒时间
3.3 疫苗的制备
    3.3.1 猪流行性腹泻病毒和猪丁型冠状病毒液的制备
    3.3.2 病毒液的PCR鉴定
    3.3.3 猪流行性腹泻和猪丁型冠状病毒TCID50 测定结果
    3.3.4 病毒液的浓缩
    3.3.5 猪流行性腹泻病毒液和猪丁型冠状病毒液的无菌检验及灭活检验
3.4 灭活疫苗的检验
    3.4.1 灭活疫苗的物理性状检验
    3.4.2 灭活疫苗的无菌检验及细胞病变检验
    3.4.3 灭活疫苗的安全性检验
3.5 疫苗免疫原性检测方法的建立
    3.5.1 重组蛋白的原核表达及重组蛋白的鉴定
    3.5.2 间接ELISA方法的建立及优化结果
    3.5.3 阴阳性临界值的确定
3.6 PEDV-PDCoV 二联灭活疫苗免疫原性实验
    3.6.1 不同剂量二联灭活疫苗免疫小鼠后PEDV ELISA抗体的消长规律
    3.6.2 不同剂量二联灭活疫苗免疫小鼠后PDCoV ELISA抗体的消长规律
    3.6.3 不同灭活疫苗免疫效果差异 4 讨论
4.1 病毒培养和病毒液浓缩
4.2 二联灭活疫苗的制备
4.3 ELISA检测方法的建立
4.4 疫苗免疫原性 5 结论 参考文献 在读期间发表的学术论文 作者简介 致谢



本文编号：3789543