H9N2禽流感病毒分子进化和致病性研究

发布时间：2023-04-12 02:35

　　H9N2亚型禽流感(AI)持续在我国鸡群中广泛流行,不仅可以感染禽类,还可以感染哺乳动物以及人类,为了明确山东及周边养殖场H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的分子进化情况及其致病性,本研究在2016年²019年间从山东及周边养殖场病鸡、病鸭等分离鉴定出37株H9N2 AIV,经病毒纯化后,将病毒各基因片段进行RT-PCR扩增和克隆测序,获得各分离株全基因组序列,并进行遗传演化和重要的氨基酸位点的变异分析。结果显示:37株H9N2 AIV 8个基因片段均属于欧亚谱系,但8个基因片段的分子进化关系呈现出基因多样性:37株HA和NA基因来自Y280-like;HA基因之间的核苷酸同源性为92.2%⁹9.9%,NA基因之间的核苷酸同源性为90.6%⁹9.9%;M、NS基因来自G1-like;PA、NP、PB1基因来自F98-like;PB2基因来自G9-like。HA蛋白的受体结合位点149、198、234和235位点变异最多,37株分离株HA第234位氨基酸(相当于H3第226位氨基酸)全部由Q突变为L,235位点全部突变为M,...

【文章页数】：96 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
符号说明
第一部分 文献综述
    1 禽流感病毒概述
        1.1 流感病毒特点与分类
        1.2 流感病毒的流行史
        1.3 主要蛋白
    2 流感病毒受体
    3 H9N2 AIV突变及致病性
    4 分子模拟技术在流感病毒突变研究中的应用
    5 研究目的和意义
第二部分 试验研究
    第一章 H9N2 亚型AIV的全基因组测序、遗传进化与抗原变异分析
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 引物设计
            1.3 H9N2 亚型AIV的鉴定
            1.4 病毒的纯化
            1.5 提取病毒RNA
            1.6 PCR产物胶回收
            1.7 连接与转化
            1.8 菌液PCR鉴定
            1.9 序列分析
            1.10 H9N2 AIV抗原性分析
        2 结果与分析
            2.1 病毒的分离与鉴定
            2.2 序列测序结果
            2.3 抗原性分析结果
        3 讨论
        4 小结
    第二章 H9N2 亚型AIV的致病性分析
        1 材料与方法
            1.1 试验材料
            1.2 H9N2 AIV的生物学测定
            1.3 H9N2 AIV感染SPF鸡的研究
            1.4 H9N2 AIV感染BALB/c雌鼠的研究
        2 结果与分析
            2.1 鸡胚半数感染量(EID50)测定结果
            2.2 组织半数感染量(TCID50)测定
            2.3 H9N2 AIV感染SPF鸡的研究
            2.4 H9N2 AIV感染BALB/c雌鼠的研究
        3 讨论
        4 小结
    第三章 HA关键突变位点预测与HA差异互作宿主蛋白筛选
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 受体结合位点关键氨基酸突变位点预测
            1.3 突变质粒的构建
            1.4 突变病毒的拯救及鉴定
            1.5 突变毒株TCID50测定
            1.6 突变毒株复制动力学
            1.7 H9N2 AIV变异HA蛋白差异互作宿主蛋白筛选
        2 结果与分析
            2.1 HA受体结合位点关键氨基酸突变位点预测结果
            2.2 突变毒株拯救结果
            2.3 突变毒株TCID50测定结果
            2.4 突变株CK/SD/903(N218Q)复制动力学
            2.5 H9N2 AIV变异HA蛋白互作宿主差异蛋白鉴定结果
        3 讨论
        4 小结
结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论著
附录
参与课题情况



本文编号：3790251