布鲁氏菌LPS对山羊子宫内膜上皮细胞内质网应激和炎症因子的影响

发布时间：2023-04-20 18:58

　　布鲁氏菌(Brucella)是革兰阴性兼性胞内寄生菌,能在家畜和人类间广泛传播而引起人和动物感染布鲁氏菌病。布鲁氏菌病属于慢性疾病,可能持续数周或数月,如果不能被有效治疗,就会引起肝脏,脾脏,淋巴结,骨髓,生殖系统以及骨骼系统出现病理变化。子宫内膜细胞是布鲁氏菌主要的靶细胞之一,已有的研究结果表明布鲁氏菌在宿主细胞内生存主要与宿主细胞的内质网(ER)紧密相关。布鲁菌LPS即布鲁菌脂多糖作为一种重要致病因子对布鲁氏菌在胞内生存和复制过程中起关键性作用。细菌裂解后会释放出LPS,大量LPS对脊椎动物(尤其是易感动物)的主要作用是通过与免疫细胞的特异性受体相互结合而对机体产生免疫应答。本试验通过提取布鲁氏菌的LPS侵染山羊子宫内膜上皮细胞(EEC),检测(1)内质网应激标志性分子GRP78和CHOP蛋白表达量变化,以及UPR通路中IRE1和ATF6蛋白表达变化,并对细胞自噬、凋亡以及炎症的影响;(2)加入内质网应激抑制剂4苯基丁酸(4-PBA)通过抑制内质网应激来验证内质网应激与细胞凋亡、自噬和炎症的关系。试验结果如下:1.采用热酚法提取纯化布鲁氏菌LPS,银染鉴定提取了的布鲁氏菌LPS;并...

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
文献综述
    第一章 布鲁氏菌的研究进展
        1.1 布鲁氏菌LPS的结构和感染机制
        1.2 布鲁氏菌LPS引起的炎症和内质网应激关系
            1.2.1 内质网应激
            1.2.2 内质网应激和炎症的相互关系
        1.3 细胞凋亡与内质网应激
        1.4 细胞自噬的研究进展
        1.5 NLRP3炎症小体的研究进展
        1.6 本试验研究目的及主要内容
试验研究
    第二章 布鲁氏菌LPS的提取纯化和鉴定
        2.1 试验材料及仪器设备
            2.1.1 菌株和细胞系
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 方法
            2.2.1 布鲁氏菌的培养
            2.2.2 布鲁氏菌LPS粗品制备
            2.2.3 布鲁氏菌LPS的纯化
            2.2.4 布鲁氏菌LPS银染鉴定
            2.2.5 硫酸-苯酚法测布鲁氏菌LPS浓度
            2.2.6 山羊子宫内膜上皮细胞的培养
            2.2.7 CCK8法测布鲁菌LPS对山羊EEC最适作用浓度
        2.3 结果
            2.3.1 布鲁氏菌LPS银染鉴定结果
            2.3.2 布鲁氏菌LPS浓度测定结果
            2.3.3 CCK8毒性试验结果
        2.4 讨论
        2.5 小结
    第三章 布鲁氏菌LPS对山羊子宫内膜上皮细胞的影响
        3.1 试验材料
            3.1.1 细胞系
            3.1.2 主要试剂
            3.1.3 主要仪器
        3.2 试验方法
            3.2.1 山羊子宫内膜上皮细胞的培养
            3.2.2 山羊子宫内膜上皮细胞的处理
            3.2.3 布鲁氏菌LPS对EEC内质网应激标志蛋白表达量影响
            3.2.4 布鲁氏菌LPS侵染山羊EEC内质网应激UPR反应相关分子mRNA表达影响
            3.2.5 布鲁氏菌LPS对山羊EEC的UPR通路中IRE1、ATF6活性的检测
            3.2.6 布鲁氏菌LPS对山羊EEC凋亡变化
            3.2.7 布鲁氏菌LPS对山羊EECCyt-cmRNA表达影响
            3.2.8 布鲁氏菌LPS对山羊EEC自噬的影响
            3.2.9 布鲁氏菌LPS对山羊EEC炎性细胞因子IL-1β、IL-8和NLRP3炎症小体相关因子mRNA水平的变化
            3.2.10 布鲁氏菌LPS对EEC炎性细胞因子IL-1β的分泌
            3.2.11 布鲁氏菌LPS对EEC炎性细胞因子IL-8的分泌
        3.3 结果
            3.3.1 布鲁氏菌LPS对山羊EEC内质网应激标志蛋白表达量变化
            3.3.2 布鲁氏菌LPS对山羊EEC内质网应激UPR信号通路的激活作用
            3.3.3 布鲁氏菌LPS对山羊EEC的IRE1、ATF6信号通路蛋白表达影响
            3.3.4 布鲁氏菌LPS对山羊EEC凋亡的影响
            3.3.5 布鲁氏菌LPS对山羊EEC自噬的影响
            3.3.6 布鲁氏菌LPS对山羊EECNLRP3炎症小体相关因子的影响
            3.3.7 布鲁氏菌LPS对山羊EEC炎性细胞因子IL-1β和IL-8分泌的影响
        3.4 讨论
        3.5 小结
    第四章 内质网应激状态对布鲁氏菌LPS刺激山羊EEC的影响
        4.1 试验材料及仪器设备
            4.1.1 细胞系
            4.1.2 主要试剂
            4.1.3 主要仪器
        4.2 试验方法
            4.2.1 山羊子宫内膜上皮细胞的培养
            4.2.2 山羊子宫内膜细胞的处理
            4.2.3 Western Blot检测内质网应激标志蛋白GRP78、CHOP和相关通路蛋白的表达
            4.2.4 4-PBA对布鲁氏菌LPS侵染山羊EEC后凋亡的影响
            4.2.5 4-PBA对布鲁氏菌LPS侵染山羊EEC凋亡标志因子Cyt-c mRNA的表达
            4.2.6 4-PBA对布鲁氏菌LPS侵染山羊EEC自噬的影响
            4.2.7 4-PBA对布鲁氏菌LPS侵染山羊EEC炎性细胞因子IL-1β、IL-8和NLRP3炎症小体相关因子mRNA的变化
            4.2.8 4-PBA对布鲁氏菌LPS侵染EEC炎性因子IL-1β的分泌
            4.2.9 4-PBA对布鲁氏菌LPS侵染EEC炎性因子IL-8 的分泌
        4.3 结果
            4.3.1 4-PBA对布鲁氏菌LPS侵染山羊EEC内质网应激蛋白表达的影响
            4.3.2 4-PBA对布鲁氏菌LPS侵染山羊EEC凋亡的影响
            4.3.3 4-PBA对布鲁氏菌LPS侵染山羊EEC自噬的影响
            4.3.4 4-PBA对布鲁氏菌LPS侵染山羊EECNLRP3炎症小体的影响
            4.3.5 4-PBA对布鲁氏菌LPS侵染山羊EEC的IL-1β、IL-8分泌的影响
        4.4 讨论
        4.5 小结
结论
参考文献
附录
缩略词
致谢
作者简介



本文编号：3795094