双峰驼IgM部分重链的原核表达及其多克隆抗体的制备

发布时间：2023-04-21 01:32

　　为获取双峰驼免疫球蛋白M(IgM)重链恒定区的表达产物及抗体,首先在GenBank找出收录的双峰驼IgM、IgA、IgE、IgG重链恒定区基因序列,比对IgM与IgA、IgE和IgG的氨基酸序列,选取一段差异较大的蛋白序列片段,转换成相对应的基因片段,PCR扩增选取的基因片段,插入pET-28a(+)载体构建重组载体,转化进大肠埃希菌BL21,并诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE鉴定重组蛋白,后利用纯化的蛋白免疫家兔,制备抗血清,ELISA和Western blot鉴定获得的血清。结果显示,成功构建了载体pET-28a-IgM,诱导表达的目的蛋白分子质量为18.7 ku,与预期相符。ELISA方法检测抗血清效价为1∶32 000,Western blot结果显示该血清能特异性识别原核表达蛋白,说明双峰驼IgM兔抗血清的成功制备。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 细胞和实验动物
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要仪器
    1.2 方法
        1.2.1 IgM片段的选取与质粒构建
        1.2.2 重组蛋白的表达与鉴定
        1.2.3 重组蛋白的纯化与复性
        1.2.4 兔抗双峰驼IgM抗血清制备
        1.2.5 兔抗双峰驼IgM抗血清效价测定
        1.2.6 兔抗双峰驼IgM抗血清的Western blot鉴定
2 结果
    2.1 双峰驼IgM基因片段的选取及分析
    2.2 重组载体的构建与鉴定
    2.3 重组蛋白的诱导表达
    2.4 重组蛋白的纯化
    2.5 多克隆抗体的效价检测
    2.6 多克隆抗体的Western blot的鉴定
3 讨论



本文编号：3795559