SIRT1调节线粒体自噬对猪肠上皮细胞氧化损伤的影响

发布时间：2023-04-21 01:13

　　肠道是应激反应的中心器官。当机体受内外环境不利因素刺激时,极易导致肠道结构及功能的损伤,诱发全身肠源性应激综合征甚至危及生命,因此健康有序的肠道结构和功能的稳定对维持动物生长、发育、繁殖以及免疫功能具有重要意义。线粒体作为细胞呼吸和能量产生的重要场所,其内膜呼吸链的氧化磷酸化是活性氧自由基(ROS)产生的主要来源,线粒体介导的选择性自噬在降解受损或多余线粒体、维护线粒体数量和质量的平衡以及细胞氧化损伤调节中发挥重要作用。研究发现沉默信息调节因子1(SIRT1)与线粒体自噬密切相关,并参与了细胞氧化损伤过程,但SIRT1调节线粒体自噬在肠道氧化损伤中的作用有待阐明。本研究主要探讨SIRT1与猪肠上皮细胞线粒体自噬的关系,分析SIRT1对猪肠上皮细胞氧化损伤的影响,为阐明肠道氧化损伤的分子机理及抗氧化产品的研发提供思路与科学依据。主要研究内容:1.氧化应激对猪肠上皮细胞氧化损伤、线粒体自噬及SIRT1/PGC-1α通路的影响用浓度为300μM H2O2处理IPEC-1细胞12 h,收取细胞样品。分别用DCFH-DA与JC-1探针检测细胞线粒体内活性氧自由基水平及膜电位变化情况;q PCR和...

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
主要缩略语表(Abbreviations)
1 文献综述
    1.1 研究问题的由来
    1.2 肠上皮细胞黏膜屏障及紧密连接简介
    1.3 氧化应激对肠道结构及功能的影响
        1.3.1 氧化应激简介及其危害
        1.3.2 氧化应激对肠道结构及功能损伤的影响
    1.4 氧化应激与线粒体自噬概述
        1.4.1 细胞自噬与线粒体自噬
        1.4.2 氧化应激对线粒体自噬的影响作用
    1.5 SIRT1在肠道氧化损伤中的作用
        1.5.1 SIRT1与氧化应激
        1.5.2 SIRT1在肠道损伤中的作用
        1.5.3 SIRT1与线粒体自噬
    1.6 研究目的和意义
2 实验材料
    2.1 引物及核苷酸序列
    2.2 细胞
    2.3 主要试剂和药品
    2.4 主要培养基和缓冲液
    2.5 主要仪器
3 实验方法
    3.1 细胞培养
    3.2 细胞总RNA提取和反转录
        3.2.1 提取细胞总RNA
        3.2.2 反转录
    3.3 荧光定量PCR(qPCR)
    3.4 细胞总蛋白提取
    3.5 BCA法测定蛋白浓度
    3.6 蛋白免疫印迹(Western Blot)
        3.6.1 SDS-PAGE电泳
        3.6.2 转膜
        3.6.3 杂交
        3.6.4 显影
    3.7 细胞活性氧(ROS)水平检测
    3.8 线粒体膜电位检测
    3.9 数据统计
4 结果与分析
    4.1 氧化应激对猪肠上皮细胞损伤的影响
        4.1.1 氧化应激对细胞ROS产生及线粒体膜电位水平的影响
        4.1.2 氧化应激对猪肠上皮细胞黏膜屏障的影响
    4.2 氧化应激对猪肠上皮细胞线粒体自噬的影响
    4.3 氧化应激对猪肠上皮细胞SIRT1/PGC-1α通路的影响
    4.4 激活剂与抑制剂对猪肠上皮细胞SIRT1/PGC-1α通路的影响
    4.5 激活SIRT1可增强氧化应激诱导的猪肠上皮细胞线粒体自噬水平
    4.6 SIRT1对猪肠上皮细胞氧化损伤的修复作用
        4.6.1 激活SIRT1对细胞中ROS及线粒体膜电位的影响
        4.6.2 激活SIRT1对细胞黏膜屏障的影响
5 讨论
    5.1 氧化应激对猪肠道损伤的影响
    5.2 氧化应激与线粒体自噬的联系
    5.3 SIRT1抗氧化应激作用与线粒体自噬的联系
    5.4 SIRT1对猪肠上皮细胞氧化损伤的作用
6 结论
参考文献
附录
    攻读硕士学位期间已发表论文
致谢



本文编号：3795533