达氟沙星单克隆抗体的制备及PELISA方法的建立

发布时间：2023-04-21 22:33

　　达氟沙星(Danofloxacin,DAN)是20世纪80年代开发的一种氟喹诺酮药物,属于第三代喹诺酮类抗菌药。其抗菌谱广,可以有效抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、衣原体、支原体、螺旋体及某些厌氧菌。DAN的作用机制是通过抑制细菌DNA螺旋酶和拓扑异构酶Ⅳ的活性,阻碍细菌DNA的合成而致其死亡。DAN因其抑菌的广谱性和有效性,常作为饲料添加剂、疫病预防与治疗药物得到广泛应用。然而,DAN的滥用会带来一系列的副作用,如导致细菌耐药性增加和药物残留等,严重威胁人类健康和动物源食品安全。目前各国政府都对其制定了限量标准,以保证动物性食品安全和人类健康。本研究自主设计方案合成了 DAN的免疫原以免疫小鼠,并将阳性小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。融合后的杂交瘤细胞经“筛选-克隆-筛选-克隆-筛选-克隆-筛选”过程,共获得了 6株细胞株。将该细胞株扩充培养后进行保种并制备腹水,腹水经纯化后共获得6种高质量的抗DAN的单克隆抗体。这6种抗DAN单克隆抗体分别为3A10-A1-C6-H1、3A10-A1-C6-G9、3A10-A1-C6-H9、3A10-A1-F1-D12、3A10-B4-D...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略语索引
第1章 引言
    1.1 概述
    1.2 达氟沙星的理化性质
    1.3 达氟沙星的作用机制
    1.4 达氟沙星的限量标准
    1.5 达氟沙星的应用现状
    1.6 达氟沙星检测技术的研究进展
        1.6.1 高效液相色谱法
        1.6.2 液相-质谱联用法
        1.6.3 毛细管电泳法
        1.6.4 荧光分光光度法
        1.6.5 旋光法
        1.6.6 免疫层析检测技术
        1.6.7 酶联免疫吸附法
    1.7 研究内容及意义
第2章 抗达氟沙星单克隆抗体的制备及评价
    2.1 前言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验仪器设备
        2.2.2 实验材料试剂
        2.2.3 实验试剂的配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 达氟沙星免疫原与包被原的制备
        2.3.2 小鼠免疫及血清评价方案
        2.3.3 细胞融合
        2.3.4 腹水制备
        2.3.5 单克隆抗体纯化
        2.3.6 抗体评价
    2.4 结果与分析
        2.4.1 免疫原表征
        2.4.2 小鼠免疫应答
        2.4.3 阳性杂交瘤细胞株的筛选
        2.4.4 抗体浓度测定
        2.4.5 抗体评价工作点的优化
        2.4.6 抗体标准曲线的建立
        2.4.7 抗体特异性的评价
    2.5 小结及展望
第3章 基于三角银纳米片的PELISA灵敏检测氟喹诺酮类药物*
    3.1 前言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验材料试剂
        3.2.2 实验仪器设备
        3.2.3 实验试剂的配制
    3.3 实验方法
        3.3.1 三角银纳米片(AgNPRs)的合成
        3.3.2 生物素化单克隆抗体的制备
        3.3.3 生物素化葡萄糖氧化酶的制备
        3.3.4 基于AgNPRs的pELISA
        3.3.5 基于TMB的ELISA
        3.3.6 pELISA的特异性分析
        3.3.7 回收率分析
    3.4 结果与分析
        3.4.1 检测原理
        3.4.2 GOx催化刻蚀AgNPRs的表征
        3.4.3 Biotin-mAb、Biotin-GOx的表征
        3.4.4 关键参数的优化
        3.4.5 基于AgNPRs刻蚀的pELISA的性能分析
        3.4.6 基于AgNPRs刻蚀的pELISA在牛奶基质中的性能分析
    3.5 结论
第4章 结论与展望
    4.1 结论
        4.1.1 抗DAN单克隆抗体的制备及评价
        4.1.2 基于AgNPRs的pELISA灵敏检测DAN
    4.2 展望
致谢
参考文献
附录1 仪器设备
附录2 实验试剂
个人简介
攻读学位期间的研究成果



本文编号：3796374