巴马小型猪精原干细胞体外分化的初步研究

发布时间：2023-04-21 21:03

　　为研究巴马小型猪精原干细胞(SSCs)的体外分化体系,本研究对巴马小型猪SSCs进行了分离、纯化和鉴定,并初步探索了其在体外诱导单倍体细胞和类胚胎干细胞的方法。. (1)对3～4周龄的巴马小型猪SSCs的分离纯化方法进行了摸索。结果发现,采用胶原酶、透明质酸酶和胰蛋白酶三步酶解法消化猪的曲精细管可以得到大量的睾丸细胞,培养60h后,通过鼠尾胶原Ⅳ和laminin进行差异贴壁法可纯化得到大量A型精原干细胞。用终浓度为15μg.ml-1的丝裂霉素C避光处理STO细胞2h, STO细胞的生长完全被抑制,死细胞较少,适合用作饲养层。 (2)对巴马小型猪SSCs体外培养特征及精原干细胞特性进行了研究。结果发现,将巴马小型猪SSCs接种在STO饲养层上1d之后,SSCs的生长状态良好,呈圆形或椭圆形,在培养了3～5d之后,部分SSCs开始形成小集落和结构紧密的克隆。克隆表达CDH1和UCHL1表面分子标记蛋白,同时也表达猪生殖细胞特有的凝集素蛋白DBA。 (3)从细胞水平和组织块水平对巴马小型猪SSCs的体外诱导分化进行初步研究。结果发现,SSCs在支持体系为睾丸体细胞,培养条件为32℃、5%CO...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略词（中英文对照表）
第一部分 文献综述——精原干细胞的研究进展
    前言
    1 SSCs的起源和精子发生
        1.1 SSCs的起源
        1.2 精子发生
    2 SSCs的生物学特性
        2.1 SSCs的形态学特征
        2.2 SSCs的发育微环境
        2.3 SSCs的分子标记
        2.4 SSCs的自我更新和分化
    3 SSCs的分离、培养和鉴定
        3.1 SSCs的分离和纯化
        3.2 SSCs的原代培养、继代培养及细胞系的建立
        3.3 SSCs体外培养的影响因素
        3.4 SSCs的鉴定
    4 SSCs体外诱导精子的研究进展
        4.1 SSCs诱导精子的意义
        4.2 SSCs诱导精子的方法
        4.3 SSCs诱导精子研究成果
        4.4 SSCs诱导精子存在的问题
    5 SSCs向类胚胎干细胞转换的研究
    6 SSCs的应用前景
        6.1. SSCs在研究精子发生机制方面的应用
        6.2 SSCs在生产转基因动物和珍贵动物保种上的应用
        6.3 SSCs在男性不育方面的应用
        6.4 SSCs在再生医学方面的应用
    7 本实验研究目的及意义
第二部分 实验部分
    前言
    第一章 巴马小型猪SSCs体外分离、培养及鉴定
        1 材料与方法
            1.1 实验材料
            1.2 实验方法
        2 实验结果
        3 分析与讨论
        4 结论
    第二章 巴马小型猪SSCs体外诱导分化精子细胞的初步研究
        前言
        1 巴马小型猪SSCs的诱导分化
            1.1 材料与方法
                1.1.1 实验材料
                1.1.2 实验方法
            1.2 实验结果
        2 巴马小型猪睾丸组织块的诱导分化
            2.1 材料与方法
                2.1.1 实验材料
                2.1.2 实验方法
            2.2 实验结果
        3 分析与讨论
        4 结论
    第三章 巴马小型猪睾丸类胚胎干细胞的诱导及鉴定
        前言
        1 材料和方法
            1.1 实验材料
            1.2 实验方法
        2 实验结果
        3 讨论与分析
        4 结论
总结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表论文情况



本文编号：3796244