IBDV急性感染阶段鸡免疫抑制性受体及细胞因子的表达变化初步研究

发布时间：2023-04-23 03:11

　　PD-1与其配体PD-Ls属于B7-CD28超家族，最早在T细胞杂交瘤细胞凋亡调节研究中发现。PD-1与PD-Ls结合后介导的抑制信号对T细胞的活化和耐受有重要的调节作用。阻断PD-1与其配体（PD-Ls）的结合可以使病毒持续性感染时功能障碍或衰竭的CD8+T细胞功能恢复。PD-1:PD-Ls通路能够在中枢免疫和外周免疫反应中传递免疫耐受和免疫抑制信号，控制着细胞因子和抗体的产生、CTL的增殖活化及对自身抗原的耐受。在动物免疫抑制性疾病或病毒持续性感染方面，T细胞免疫抑制性受体PD-1的研究才刚刚起步，特别是在家禽类该方面的研究还少见报道。 本课题以IBDV感染后T淋巴细胞表面免疫抑制性受体PD-1及其配体PD-Ls为对象，研究其表达变化情况及其与机体免疫状态的关系。根据GenBank中鸡PD-1、PD-L1、PD-L2、IL-2、IL-6、IFN-γ以及参考基因β-actin的序列信息，分别设计特异引物扩增目的基因片段，得到各自阳性克隆质粒，以阳性质粒作为标准品建立标准曲线，并进行敏感性、特异性和重复性试验，建立上述基因的SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR检测方法。并利...

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

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缩略词表
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1 前言
    2 IBDV 致病机理
        2.1 IBDV 对体液免疫的影响
        2.2 IBDV 对细胞免疫的影响
        2.3 IBDV 对先天免疫的影响
    3 PD-1 及配体概述
        3.1 PD-1 及其配体的结构
        3.2 PD-1 及配体的表达
        3.3 PD-1:PD-Ls 通路在中枢免疫和外周免疫反应中传递免疫耐受和免疫抑制信号
    4 展望
引言
第二章 鸡 PD-1、PD-L1、PD-L2 及细胞因子 IL-2、IL-6、IFN-γ实时荧光定量 RT-PCR 检测方法的建立
    1 材料
        1.1 实验动物和菌种
        1.2 主要试剂
        1.3 主要试剂的配制
        1.4 主要仪器设备
    2 方法
        2.1 引物设计与合成
        2.2 总 RNA 的提取与反转录
        2.3 待测基因及参考基因β-actin 的 PCR 扩增
        2.4 待测基因及参考基因β-actin 的 PCR 产物的回收
        2.5 待测基因及参考基因β-actin 与 pMD18-T-simple 克隆载体连接
        2.6 待测基因及参考基因β-actin 重组克隆质粒浓度的测定
        2.7 待测基因及参考基因β-actin 实时荧光定量 RT-PCR 标准曲线的建立
        2.8 敏感性、特异性和重复性试验
        2.9 临床样品的应用研究
    3 结果与分析
        3.1 待测基因及参考基因β-actin PCR 结果
        3.2 质粒标准品的制备
        3.3 标准曲线的绘制
        3.4 特异性、敏感性及重复性分析
        3.5 临床样品的应用研究
    4 讨论
        4.1 参考基因的选择
        4.2 SYBR GreenⅠ实时荧光定量 PCR 的优势
        4.3 标准品的制备
        4.4 SYBR GreenⅠ实时荧光定量 RT-PCR 检测方法的建立
    5 小结
第三章 IBDV 感染后 PD-1 及其配体 PD-L1、PD-L2 及细胞因子的表达情况初步研究
    1 材料与方法
        1.1 实验动物和菌种
        1.2 主要试剂和仪器
        1.3 主要试剂的配制
        1.4 主要仪器设备
        1.5 引物的设计与合成
        1.6 感染后法氏囊内 IBDV 载量检测
        1.7 IBDV 感染后鸡 PD-1、PD-L1、PD-L2 和细胞因子 IL-2、IL-6 及 IFN-γ表达水平检测
        1.8 数据分析
    2 结果与分析
        2.1 IBDV 感染后法氏囊内 IBDV 载量检测
        2.2 IBDV 感染后鸡 PD-1、PD-L1、PD-L2 表达变化
        2.3 IBDV 感染后细胞因子 IL-2、IL-6 及 IFN-γ表达变化
    3 讨论
        3.1 PD-1、PD-Ls 的表达变化与免疫抑制的关系
    4 小结
全文结论
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢



本文编号：3798963