FHL2通过与TGF-α/EGFR通路互作调控KGN细胞增殖
发布时间：2023-04-28 14:46
FHL2(Four and a half LIM domains protein 2)基因是FHL基因家族中研究最多的一位成员,FHL2不仅可以结合不同转录因子调控相关基因表达,而且对于细胞信号转导通路也有重要调控作用。研究表明FHL2在人卵巢颗粒细胞瘤细胞中表达,转化生长因子-α(Transforming growth factor-α,TGF-α)可通过PI3K/AKT和MAPK信号通路调控人卵巢颗粒细胞瘤细胞KGN增殖。但FHL2对KGN细胞的调控作用、TGF-α与FHL2互作、以及该互作对颗粒细胞的调控作用尚不清楚。本课题以KGN为模型,对上述问题予以探究。本研究结果将为深入了解卵泡发育和卵泡发育的调控机制提供新的理论基础,同时为卵泡发育相关信号转导通路提供新的研究思路。主要研究结果如下:1.FHL2调控KGN细胞的增殖、周期及TGF-α的表达干扰KGN细胞中FHL2的表达后,分别利用CCK-8试剂盒、流式细胞术以及RT-PCR检测FHL2对细胞增殖、周期的影响以及对TGF-α的表达调控:1)CCK-8法检测细胞增殖结果显示,FHL2干扰组细胞存活率(1.00±0.01 vs0...
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表
1 前言
1.1 研究问题的由来
1.2 FHL2基因研究进展
1.2.1 FHL2基本结构
1.2.2 FHL2基因的表达和定位
1.2.3 FHL2基因的主要功能
1.2.4 FHL2基因在肿瘤细胞中的研究进展
1.2.5 FHL2基因调节卵巢颗粒细胞发育的研究进展
1.3 TGF-α 研究进展
1.3.1 TGF-α 的基本结构
1.3.2 TGF-α 的表达和基本功能
1.3.3 TGF-α 参与调控卵巢颗粒细胞发育
1.4 实验的目的和意义
2 实验材料
2.1 实验细胞
2.2 实验试剂与耗材
2.3 实验仪器
2.4 实验试剂的配制
3 实验方法
3.1 人卵巢颗粒细胞瘤细胞系KGN的培养、传代及冻存
3.1.1 细胞培养
3.1.2 细胞传代
3.1.3 细胞冻存
3.1.4 细胞复苏
3.2 细胞转染
3.3 细胞加药处理
3.3.1 TGF-α 处理细胞
3.3.2 通路抑制剂处理细胞
3.4 细胞计数
3.5 细胞周期检测
3.6 CCK-8 法检测细胞增殖
3.7 人卵巢颗粒细胞瘤细胞系KGN总RNA的提取
3.7.1 RNA的抽提
3.7.2 RNA浓度及质量检测
3.8 cDNA链反转录合成
3.8.1 cDNA第一链合成
3.8.2 cDNA的浓度检测
3.9 引物设计
3.10 QRT-PCR
3.11人卵巢颗粒细胞瘤细胞系KGN总蛋白提取和Western Blot实验
3.11.1 蛋白的提取
3.11.2 蛋白浓度检测及制样
3.11.3 蛋白免疫印迹
3.12 实验设计
3.12.1 FHL2影响卵巢颗粒细胞的生长
3.12.2 TGF-α 对KGN细胞增殖的影响及调控FHL2的表达
3.12.3 TGF-α 调控FHL2作用的相关信号通路探究
3.13 数据分析
4 实验结果
4.1 FHL2对卵巢颗粒细胞的调控作用
4.1.1 si-FHL2干扰效果检测
4.1.2 FHL2对KGN细胞增殖的影响
4.1.3 FHL2对KGN细胞周期的影响
4.1.4 FHL2对TGF-α、EGFR基因表达的影响
4.2 TGF-α 对KGN细胞增殖的影响及调控FHL2的表达
4.2.1 TGF-α 促进KGN细胞增殖
4.2.2 TGF-α 促进FHL2的表达
4.2.3 TGF-α 调控FHL2、EGFR、TGF-α 基因的表达
4.3 TGF-α 调控FHL2基因表达的相关信号通路研究
5 讨论
5.1 KGN细胞是研究卵巢颗粒细胞功能的良好模型
5.2 FHL2对KGN细胞的增殖和周期具有重要调控作用
5.3 TGF-α 对KGN细胞的调控作用依赖于FHL2的表达量
5.4 TGF-α 与FHL2互作共同调控颗粒细胞的增殖
5.5 TGF-α 调控FHL2相关信号通路探究
6 总结
6.1 本试验主要结果
6.2 本试验创新点
6.3 本试验不足点及下一步计划
参考文献
致谢
本文编号：3804004
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表
1 前言
1.1 研究问题的由来
1.2 FHL2基因研究进展
1.2.1 FHL2基本结构
1.2.2 FHL2基因的表达和定位
1.2.3 FHL2基因的主要功能
1.2.4 FHL2基因在肿瘤细胞中的研究进展
1.2.5 FHL2基因调节卵巢颗粒细胞发育的研究进展
1.3 TGF-α 研究进展
1.3.1 TGF-α 的基本结构
1.3.2 TGF-α 的表达和基本功能
1.3.3 TGF-α 参与调控卵巢颗粒细胞发育
1.4 实验的目的和意义
2 实验材料
2.1 实验细胞
2.2 实验试剂与耗材
2.3 实验仪器
2.4 实验试剂的配制
3 实验方法
3.1 人卵巢颗粒细胞瘤细胞系KGN的培养、传代及冻存
3.1.1 细胞培养
3.1.2 细胞传代
3.1.3 细胞冻存
3.1.4 细胞复苏
3.2 细胞转染
3.3 细胞加药处理
3.3.1 TGF-α 处理细胞
3.3.2 通路抑制剂处理细胞
3.4 细胞计数
3.5 细胞周期检测
3.6 CCK-8 法检测细胞增殖
3.7 人卵巢颗粒细胞瘤细胞系KGN总RNA的提取
3.7.1 RNA的抽提
3.7.2 RNA浓度及质量检测
3.8 cDNA链反转录合成
3.8.1 cDNA第一链合成
3.8.2 cDNA的浓度检测
3.9 引物设计
3.10 QRT-PCR
3.11人卵巢颗粒细胞瘤细胞系KGN总蛋白提取和Western Blot实验
3.11.1 蛋白的提取
3.11.2 蛋白浓度检测及制样
3.11.3 蛋白免疫印迹
3.12 实验设计
3.12.1 FHL2影响卵巢颗粒细胞的生长
3.12.2 TGF-α 对KGN细胞增殖的影响及调控FHL2的表达
3.12.3 TGF-α 调控FHL2作用的相关信号通路探究
3.13 数据分析
4 实验结果
4.1 FHL2对卵巢颗粒细胞的调控作用
4.1.1 si-FHL2干扰效果检测
4.1.2 FHL2对KGN细胞增殖的影响
4.1.3 FHL2对KGN细胞周期的影响
4.1.4 FHL2对TGF-α、EGFR基因表达的影响
4.2 TGF-α 对KGN细胞增殖的影响及调控FHL2的表达
4.2.1 TGF-α 促进KGN细胞增殖
4.2.2 TGF-α 促进FHL2的表达
4.2.3 TGF-α 调控FHL2、EGFR、TGF-α 基因的表达
4.3 TGF-α 调控FHL2基因表达的相关信号通路研究
5 讨论
5.1 KGN细胞是研究卵巢颗粒细胞功能的良好模型
5.2 FHL2对KGN细胞的增殖和周期具有重要调控作用
5.3 TGF-α 对KGN细胞的调控作用依赖于FHL2的表达量
5.4 TGF-α 与FHL2互作共同调控颗粒细胞的增殖
5.5 TGF-α 调控FHL2相关信号通路探究
6 总结
6.1 本试验主要结果
6.2 本试验创新点
6.3 本试验不足点及下一步计划
参考文献
致谢
本文编号：3804004
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3804004.html
