重组口蹄疫病毒VP1-VP4蛋白诱导的免疫应答研究

发布时间：2023-04-29 17:54

　　口蹄疫(foot-and-mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒(FMD virus，FMDV)感染偶蹄兽所引起的一种急性、发热性、高度接触性传染病。目前本病尚无有效的预防控制措施。清除病毒感染需要活化的CD8+T细胞、Th1应答与高水平的中和抗体，但对于外源性抗原，则需要CD8α+DCs以抗原交叉提呈的方式激活CD8+T细胞。体外实验发现，被A型清道夫受体（SR-A）抑制剂处理的树突状细胞(DCs)提呈重组FMDV结构蛋白VP1-VP4的能力非但没有被抑制，反而还显著增强，这表明SR-A识别VP1-VP4对DCs启动的细胞免疫应答具有负调节作用。据此，我们给小鼠腹腔注射番泻苷B或单宁酸以阻断SR-A与VP1-VP4的结合，静脉注射细胞色素C以清除小鼠体内的CD8α+DCs，然后分别给上述小鼠皮下注射VP1-VP4与IMS251cVG佐剂混合所制成的试验疫苗，并以单独注射VP1-VP4蛋白或商用口蹄疫灭活疫苗为对照，通过检测各组小鼠血清IFN-γ与IL-4的含量和抗体效价与各类型抗体的含量，以揭示SR-A和CD8α+DCs在机体产生抗FMDV免疫应答中的作用。 结果发现，单...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词索引表
1 引言
    1.1 口蹄疫研究进展
        1.1.1 口蹄疫流行病学研究
        1.1.2 口蹄疫病毒研究进展
        1.1.3 口蹄疫疫苗研究进展
    1.2 口蹄疫细胞免疫研究
    1.3 口蹄疫体液免疫研究
    1.4 细胞对FMDV的模式识别与适应性免疫应答
    1.5 本研究的目的和意义
2 实验材料和方法
    2.1 主要实验材料
    2.2 主要仪器设备
    2.3 实验相关试剂的配制
        2.3.1 重组菌的培养和诱导表达用液
        2.3.2 SDS-PAGE 相关溶液
        2.3.3 电洗脱用液
        2.3.4 溶解细胞色素 C 与番泻苷 B 用液的配制
    2.4 实验方法
        2.4.1 重组口蹄疫病毒 VP1-VP4 蛋白的制备
        2.4.2 菌株选择
        2.4.3 重组菌的诱导表达
        2.4.4 SDS-PAGE 凝胶的制备
        2.4.5 表达产物蛋白的 SDS- PAGE 电泳
        2.4.6 目的蛋白的回收纯化及电洗脱
        2.4.7 蛋白质浓度的测定
    2.5 实验动物的分组与处理
    2.6 待检测血清样品的收集与检测
    2.7 统计处理
3.实验结果与分析
    3.1 实验结果
        3.1.1 Pet32a-VP1-VP4 原核表达、纯化及纯度鉴定
        3.1.2 SR-A 抑制剂降低免疫 VP1-VP4 蛋白小鼠血清 IFN-γ和 IL-4 含量
        3.1.3 抑制 SR-A 对免疫 VP1-VP4 抗原小鼠体液免疫应答的作用
        3.1.4 清除体内 CD8α+ DCs 对免疫 VP1-VP4 蛋白小鼠血清 IFN-γ和 IL-4 含量以及体液免疫应答的作用
        3.1.5 清除 CD8α+ DCs 对免疫 VP1-VP4 蛋白小鼠血清抗体效价的影响
        3.1.6 注射 VP1-VP4 蛋白试验疫苗诱导的免疫应答
    3.2 分析
4 结论
    4.1 在体内情况下，SR-A 识别 VP1-VP4 对小鼠启动 IFN-γ应答具有负调节作用
    4.2 CD8α⁺DCs 在体内情况下，主要通过 MHC-II 类分子途径激活 CD4⁺T 细胞，产生以IL-4 为特征的细胞免疫应答
    4.3 体内抑制 SR-A 或清除体内 CD8α⁺DCs 导致免疫应答转向 Th1 应答
    4.4 体内抑制 SR-A 或清除体内 CD8α⁺DCs 有利于粘膜免疫应答
    4.5 番泻苷 B 或单宁酸作为口蹄疫蛋白质疫苗的佐剂成分是可行的
参考文献
在读期间发表的学术论文
作者简历
致谢



本文编号：3805457