miR-374b及其靶基因Myf6调控成肌细胞增殖分化的研究

发布时间：2023-04-29 18:57

　　本实验旨在研究miR-374b及其靶基因Myf6调控肌细胞增殖分化的作用机制。首先采集70日龄胎羊,培养成肌细胞并诱导分化成肌管,通过荧光定量PCR测定诱导分化时期(0、24、72、120 h)miR-374b、Myf6基因以及成肌细胞增殖标志基因MyoD和分化标志基因MyoG、MyHC在mRNA水平的表达量;通过转染miR-374b过表达载体(mimics)及抑制载体(inhibitor),研究各基因在细胞中mRNA水平的表达规律;采用蛋白免疫印迹技术检测Myf6基因在细胞中蛋白水平表达变化规律。结果表明:细胞在分化第72、120小时出现大量肌管,诱导分化成功;miR-374b的表达趋势为先上升后下降,细胞增殖标志基因MyoD在细胞增殖期(0 h)表达量较高;分化标志基因MyHC、MyoG及Myf6基因在细胞增殖期表达量较低,进入分化阶段后表达量极显著上调;转染miR-374b过表达载体(mimics)后,miR-374b表达量极显著高于阴性对照组,而Myf6基因、MyHC基因表达量极显著低于阴性对照组;Myf6基因蛋白表达量极显著低于阴性对照组;转染miR-374b抑制载体(inh...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验动物及样品采集
    1.2 成肌细胞分离培养
    1.3 诱导成肌细胞分化
    1.4 不同分化时期实时荧光定量PCR
    1.5 细胞转染
    1.6 转染后细胞实时荧光定量PCR
    1.7 Western blot检测
2 结果
    2.1 成肌细胞的体外分化
    2.2 不同分化时期基因表达量
    2.3 miR-374b调控Myf6及各标志基因的表达
3 讨论
4 结论



本文编号：3805555