几个基因与LPS信号通路的关系及金英汤对其影响
发布时间：2023-05-04 04:05
脂多糖(LPS)是引起炎症的刺激源之一,常用于建立炎症模型。前期研究发现5μg/mL的LPS刺激6 h能引起小鼠乳腺上皮细胞(MECs)生长活性及炎性因子分泌发生变化,LPS早期刺激炎症信号通路尚不清楚。为了探明LPS早期刺激MECs免疫炎性关键基因及金英黄归汤(简称金英汤,JYT)对其影响,本研究采用ELISA检测5μg/mL的LPS刺激细胞6 h细胞分泌炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌量验证细胞早期炎症反应,运用转录组测序技术(RNA-seq)检测LPS刺激细胞后的差异基因,进行GO和KEGG Pathway分析筛选与炎症免疫相关基因,并用实时荧光定量PCR(qPCR)验证部分差异基因相关性,通过siRNA转染技术沉默差异基因中Cxcl1、Ccl2研究其在LPS信号通路中关键靶向,并运用qPCR检测金英汤对Cxcl1、Csf2、Csf3、Ccl2、Met、Birc3、Icam1和Cav1 mRNA的影响。结果显示:(1)5μg/mL的LPS刺激小鼠MECs 6 h,细胞分泌的炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6都显著或极显著的升高(P<0.05,P<0...
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
前言
1 材料
1.1 实验动物
1.2 主要药物及试剂
1.3 主要溶液配制
1.4 主要实验仪器
2 方法
2.1 ELISA法检测LPS致小鼠MECs分泌的炎性因子
2.2 RNA-seq筛选LPS作用小鼠MECs前后差异表达基因
2.2.1 细胞总RNA提取及质检
2.2.2 RNA-seq检测
2.2.3 上调差异基因数据分析
2.3 GO和Pathway分析筛选与炎症免疫相关的基因
2.4 部分差异表达基因的qPCR验证
2.5 Cxcl1和Ccl2在小鼠MECsLPS炎症免疫信号通路中作用地位的分析
2.5.1 转染片段设计及最佳转染条件筛选
2.5.2 实时荧光定量PCR检测Cxcl1、Ccl2沉默后对LPS信号通路中NF-κBp65的影响
2.5.3 ELISA法检测Cxcl1、Ccl2沉默后对LPS致细胞分泌TNF-α、IL-1β和IL-6的影响
2.6 实时荧光定量PCR检测金英汤对Cxcl1、Csf2、Csf3、Ccl2、Met、Birc3、Icam1、Cav1mRNA的影响
2.7 统计学处理
3 结果
3.1 LPS对MECs分泌炎性因子TNF-α、IL-1β及IL-6的影响
3.2 LPS刺激后小鼠MECs差异表达基因
3.2.1 RNA提取及质检结果
3.2.2 转录组测序分析结果
3.3 小鼠MECs与炎症免疫相关的差异表达基因
3.3.1 基因功能及GO分析
3.3.2 LPS信号通路相关Pathway分析
3.3.3 部分差异表达基因的RT-qPCR验证
3.4 Cxcl1、Ccl2在LPS炎症信号通路中的作用地位
3.4.1 Cxcl1、Ccl2的siRNA最佳转染条件
3.4.2 Cxcl1、Ccl2基因沉默后对LPS信号通路中NF-κBp65的影响
3.4.3 Cxcl1、Ccl2基因沉默后对LPS致细胞分泌炎性因子TNF-α、IL-及IL-1β量的影响
3.5 金英汤对MECs中8个差异基因的影响
4 讨论
4.1 LPS刺激小鼠MECs建立炎症模型
4.2 LPS刺激后小鼠MECs中差异表达基因
4.3 小鼠MECs中与LPS信号通路相关的上调差异基因
4.4 Cxcl1、Ccl2与LPS信号通路的关系
4.5 金英汤对LPS信号通路相关因子的影响
5 结论
文献综述
1 炎症与LPS及其信号通路
1.1 炎症的概述
1.2 LPS概述
1.3 LPS信号通路
2 RNA-seq研究进展
2.1 转录组测序基础分析示意图
2.2 测序基础分析方法
2.3 RNA-seq在转录组学中的优势
2.4 转录组技术的应用
2.4.1 基因功能注释及获取新转录本
2.4.2 进行基因转录水平研究
2.4.3 非转录RNA功能研究
2.4.4 转录本结构变异研究
2.4.5 分子标记的开发
2.4.6 新基因的挖掘及其功能预测
2.5 RNA-seq的研究展望
3 Cxcl1和Ccl2的生物学特性及功能
3.1 Cxcl1的生物学特性及功能
3.2 Ccl2的生物学特性及功能
4 siRNA研究进展
4.1 siRNA的作用机制
4.2 siRNA技术的特征
4.3 siRNA的应用
5 中药的抗炎免疫及其机制研究
参考文献
附录一 在读硕士期间发表论文情况
附录二 在读期间参与的科研项目
致谢
本文编号：3807914
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
前言
1 材料
1.1 实验动物
1.2 主要药物及试剂
1.3 主要溶液配制
1.4 主要实验仪器
2 方法
2.1 ELISA法检测LPS致小鼠MECs分泌的炎性因子
2.2 RNA-seq筛选LPS作用小鼠MECs前后差异表达基因
2.2.1 细胞总RNA提取及质检
2.2.2 RNA-seq检测
2.2.3 上调差异基因数据分析
2.3 GO和Pathway分析筛选与炎症免疫相关的基因
2.4 部分差异表达基因的qPCR验证
2.5 Cxcl1和Ccl2在小鼠MECsLPS炎症免疫信号通路中作用地位的分析
2.5.1 转染片段设计及最佳转染条件筛选
2.5.2 实时荧光定量PCR检测Cxcl1、Ccl2沉默后对LPS信号通路中NF-κBp65的影响
2.5.3 ELISA法检测Cxcl1、Ccl2沉默后对LPS致细胞分泌TNF-α、IL-1β和IL-6的影响
2.6 实时荧光定量PCR检测金英汤对Cxcl1、Csf2、Csf3、Ccl2、Met、Birc3、Icam1、Cav1mRNA的影响
2.7 统计学处理
3 结果
3.1 LPS对MECs分泌炎性因子TNF-α、IL-1β及IL-6的影响
3.2 LPS刺激后小鼠MECs差异表达基因
3.2.1 RNA提取及质检结果
3.2.2 转录组测序分析结果
3.3 小鼠MECs与炎症免疫相关的差异表达基因
3.3.1 基因功能及GO分析
3.3.2 LPS信号通路相关Pathway分析
3.3.3 部分差异表达基因的RT-qPCR验证
3.4 Cxcl1、Ccl2在LPS炎症信号通路中的作用地位
3.4.1 Cxcl1、Ccl2的siRNA最佳转染条件
3.4.2 Cxcl1、Ccl2基因沉默后对LPS信号通路中NF-κBp65的影响
3.4.3 Cxcl1、Ccl2基因沉默后对LPS致细胞分泌炎性因子TNF-α、IL-及IL-1β量的影响
3.5 金英汤对MECs中8个差异基因的影响
4 讨论
4.1 LPS刺激小鼠MECs建立炎症模型
4.2 LPS刺激后小鼠MECs中差异表达基因
4.3 小鼠MECs中与LPS信号通路相关的上调差异基因
4.4 Cxcl1、Ccl2与LPS信号通路的关系
4.5 金英汤对LPS信号通路相关因子的影响
5 结论
文献综述
1 炎症与LPS及其信号通路
1.1 炎症的概述
1.2 LPS概述
1.3 LPS信号通路
2 RNA-seq研究进展
2.1 转录组测序基础分析示意图
2.2 测序基础分析方法
2.3 RNA-seq在转录组学中的优势
2.4 转录组技术的应用
2.4.1 基因功能注释及获取新转录本
2.4.2 进行基因转录水平研究
2.4.3 非转录RNA功能研究
2.4.4 转录本结构变异研究
2.4.5 分子标记的开发
2.4.6 新基因的挖掘及其功能预测
2.5 RNA-seq的研究展望
3 Cxcl1和Ccl2的生物学特性及功能
3.1 Cxcl1的生物学特性及功能
3.2 Ccl2的生物学特性及功能
4 siRNA研究进展
4.1 siRNA的作用机制
4.2 siRNA技术的特征
4.3 siRNA的应用
5 中药的抗炎免疫及其机制研究
参考文献
附录一 在读硕士期间发表论文情况
附录二 在读期间参与的科研项目
致谢
本文编号：3807914
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3807914.html
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