小尾寒羊β 2 微球蛋白的表达及其二级结构预测分析

发布时间：2023-05-06 20:28

　　为研究小尾寒羊绵羊白细胞抗原Ⅰ(Ovis aries leukocyte antigen classⅠ,OLAⅠ)轻链四聚体前体链β₂微球蛋白(β₂-microglobulin,β₂m)的结构和功能,根据GenBank中公布的绵羊β₂m基因设计特异性引物,提取小尾寒羊全血中的RNA并运用RT-PCR方法扩增绵羊β₂m基因,将扩增的绵羊β₂m基因克隆到pMD18-T载体,筛选出阳性克隆菌pMD18T-OLAⅠ-β₂m,经双酶切后与表达载体pET-28a(+)连接,再转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中构建pET-28a(+)-OLAⅠ-β₂m重组表达菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白大小及表达情况;运用SOMPA在线软件预测OLAⅠ-β₂m蛋白的二级结构。PCR扩增结果显示,目的基因大小为357 bp,与理论值相符,扩增片段成功克隆到pMD18-T载体,经EcoRⅠ和H...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 引物设计及合成
        1.2.2 OLAⅠ-β2m基因序列的亚克隆
        1.2.3 pET-28a(+)-OLAⅠ-β2m在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中的诱导表达
        1.2.4 pET-28a(+)-OLAⅠ-β2m蛋白的提取及纯化
        1.2.5 SDS-PAGE检测蛋白表达
        1.2.6 Western blotting检测蛋白表达
        1.2.7 OLAⅠ-β2m序列及OLAⅠ-β2m蛋白质二级结构分析
2 结 果
    2.1 OLAⅠ-β2m基因胞外区PCR扩增
    2.2 pMD18T-OLAⅠ-β2m重组质粒的鉴定
    2.3 pET-28a(+)-OLAⅠ-β2m重组质粒的鉴定
    2.4 重组OLAⅠ-β2m在大肠杆菌中的诱导表达及SDS-PAGE鉴定
    2.5 OLAⅠ-β2m的Western blotting结果
    2.6 OLAⅠ-β2m序列分析及OLAⅠ-β2m蛋白质二级结构分析
3 讨 论
4 结 论



本文编号：3809559