大鼠心肌细胞Hsp60/Hsp10的表达及抗热应激损伤机理研究
发布时间：2023-05-06 21:03
季节性气候因素对养殖业的影响不容忽视,作为一个养殖业大国,我国每年由热应激造成的养殖业经济损失十分惊人。因此,增加针对动物的热应激损伤特征和规律研究对减少热应激损伤具有重要意义。热应激是一种全身性的反应,对动物的行为、采食量、生产性能、血液循环、神经内分泌、免疫和生殖等方面均会产生不利影响。但热应激过程中可转录合成一组具有高度保守性的特殊蛋白-热休克蛋白(heat shock proteins,Hsps)对维持细胞生存和内环境的稳定也起着十分重要的作用。热休克蛋白60(Hsp60)作为热休克蛋白家族重要的一员,已被证明与心血管疾病、自身免疫系统疾病等的发生发展密切相关。本文的主要目的在于通过对大鼠和离体培养的鼠源H9C2心肌细胞进行不同时间的热应激处理,拟动态观察和了解热应激大鼠心肌细胞中Hsp60及其相应mRNA的转录和表达水平,以及Hsp60在体内、外心肌细胞中的定位和分布等特点,研究热应激过程中Hsp60的变化规律与大鼠心肌细胞热应激损伤的相关性,探讨Hsp60的组织细胞保护机制。为研究热应激对体内、外大鼠心肌细胞造成的应激性损伤及其程度,本试验通过病理学检测,观察了受试大鼠心肌...
【文章页数】：137 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
部分缩写的中英文对照
引言
上篇 文献综述
一、热应激概述
1 热应激的概念
1.1 应激的概念
1.2 应激的分类
1.3 应激的调节
2 热应激对机体的影响
2.1 热应激对动物行为的影响
2.2 热应激对动物采食量的影响
2.3 热应激对动物生产性能的影响
2.4 热应激对动物血液生化指标的影响
2.5 热应激对动物内分泌系统的影响
2.6 热应激对动物免疫功能的影响
2.7 热应激对动物生殖系统的影响
二、热休克蛋白(Heat shock proteins,HSPs)
1 HSPs的概念
2 HSPs的分类和特点
3 HSPs与热应激损伤
4 Hsp60/Hsp10的结构与功能
5 Hsp60/Hsp10的分布与功能
6 Hsp60/Hsp10与疾病
6.1 Hsp60/Hsp10与心血管疾病的关系
6.2 Hsp60/Hsp10与癌症的关系
7 Hsp60/Hsp10与免疫的关系
8 Hsp60/Hsp10基因表达的调控
9 Hsp60/Hsp10的研究展望
参考文献
下篇 试验研究
第一章 体内、外大鼠心肌细胞热应激模型建立及热应激性损伤特点
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 试验动物及细胞
1.1.2 器材与设备
1.1.3 主要试剂
1.1.4 主要溶液配制
1.2 方法
1.2.1 在体实验动物分组及取样
1.2.2 离体实验细胞分组及取样
1.2.3 HE染色
1.2.4 MTT试验
2 结果
2.1 受试大鼠的临床症状
2.2 热应激对H9C2离体大鼠心肌细胞活力及存活率的影响
2.3 在体和离体大鼠心肌细胞在热应激状态下的组织病理学变化
2.4 热应激导致的死亡大鼠心肌细胞的病理学变化
3 讨论
参考文献
第二章 热应激状态下Hsp60在大鼠离体和在体心肌细胞中的表达与定位
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 试验动物及细胞
1.1.2 器材与设备
1.1.3 主要试剂
1.1.4 主要溶液配制
1.1.5 分析工具软件
1.2 方法
1.2.1 在体实验动物分组及取样
1.2.2 离体实验细胞分组及取样
1.2.3 Westem blot检测
1.2.4 荧光定量PCR检测
1.2.5 免疫组织化学方法检测Hsp60蛋白在热应激大鼠心肌细胞中的表达
1.2.6 间接免疫荧光检测Hsp60蛋白在热应激H9C2大鼠心肌细胞中的表达
2 结果
2.1 热应激大鼠体内、外心肌细胞Hsp60表达水平的变化
2.2 热应激大鼠体内、外心肌细胞hsp60 mRNA表达水平的变化
2.3 热应激大鼠体内、外心肌细胞内Hsp60的定位
2.4 热应激导致的死亡大鼠心肌细胞中Hsp60的表达
2.5 热应激4h后H9C2大鼠心肌细胞中Hsp60的定位
3 讨论
参考文献
第三章 热应激状态下Hsp60相关蛋白Hsp10在大鼠心肌细胞中的表达与定位
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 试验动物及细胞
1.1.2 器材与设备
1.1.3 主要试剂
1.2 方法
1.2.1 在体实验试验分组及取样
1.2.2 离体实验分组及取样
1.2.3 Western blot检测
1.2.4 荧光定量PCR检测
1.2.5 间接免疫荧光测Hsp10蛋白在热应激H9C2大鼠心肌细胞中的表达
1.2.6 软件统计分析
2 结果
2.1 热应激大鼠心肌细胞Hsp10蛋白表达水平的变化
2.2 热应激大鼠心肌细胞hsp10 mRNA表达水平的变化
2.3 热应激处理的H9C2大鼠心肌细胞系Hsp10蛋白的定位结果
2.4 大鼠组织细胞中Hsp60和Hsp10的相关性分析
3 讨论
参考文献
第四章 细胞外的Hsp60对热应激处理H9C2心肌细胞的保护效应及其机理的初步研究
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验用细胞
1.1.2 器材与设备
1.1.3 主要试剂
1.1.4 主要溶液的配制
1.2 方法
1.2.1 H9C2大鼠心肌细胞上清液中Hsp60的检测
1.2.2 MAPK通路相关蛋白ERK、JNK抑制剂浓度的选择
1.2.3 流式细胞术检测心肌细胞的损伤
1.2.4 Western Blotting
1.2.5 荧光定量
2 结果
2.1 H9C2大鼠心肌细胞上清液中Hsp60的检测
2.2 抑制剂PD98059和SP600125浓度的筛选
2.3 热应激对H9C2心肌细胞凋亡和坏死的影响
2.4 抑制细胞膜外的Hsp60对热应激H9C2心肌细胞损伤及相关基因的影响
2.4.1 抑制细胞膜外的Hsp60对热应激H9C2细胞损伤的影响
2.4.2 抑制细胞膜外的Hsp60对热应激H9C2心肌细胞损伤相关基因的影响
2.5 抑制ERK和JNK的活化对热应激H9C2细胞损伤的影响
2.6 热应激对H9C2心肌细胞ERK和JNK蛋白磷酸化的影响
2.6.1 热应激对H9C2心肌细胞ERK和JNK蛋白磷酸化的影响
2.6.2 热应激对抑制了细胞外的Hsp60后的H9C2心肌细胞ERK和JNK蛋白磷酸化的影响
2.7 抑制细胞外的Hsp60对热应激H9C2细胞ERK和JNK蛋白磷酸化的影响
2.8 抑制细胞外的Hsp60及MAPK相关蛋白对热应激H9C2细胞内Hsp60及其相关蛋白Hsp10的影响
2.8.1 MAPK抑制剂对热应激H9C2细胞内Hsp60和Hsp10的影响
2.8.2 抑制细胞膜外的Hsp60对热应激H9C2细胞内Hsp60和Hsp10的影响
3 讨论
参考文献
全文总结
本文创新点
致谢
攻读博士学位期间发表的论文
本文编号：3809609
【文章页数】：137 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
部分缩写的中英文对照
引言
上篇 文献综述
一、热应激概述
1 热应激的概念
1.1 应激的概念
1.2 应激的分类
1.3 应激的调节
2 热应激对机体的影响
2.1 热应激对动物行为的影响
2.2 热应激对动物采食量的影响
2.3 热应激对动物生产性能的影响
2.4 热应激对动物血液生化指标的影响
2.5 热应激对动物内分泌系统的影响
2.6 热应激对动物免疫功能的影响
2.7 热应激对动物生殖系统的影响
二、热休克蛋白(Heat shock proteins,HSPs)
1 HSPs的概念
2 HSPs的分类和特点
3 HSPs与热应激损伤
4 Hsp60/Hsp10的结构与功能
5 Hsp60/Hsp10的分布与功能
6 Hsp60/Hsp10与疾病
6.1 Hsp60/Hsp10与心血管疾病的关系
6.2 Hsp60/Hsp10与癌症的关系
7 Hsp60/Hsp10与免疫的关系
8 Hsp60/Hsp10基因表达的调控
9 Hsp60/Hsp10的研究展望
参考文献
下篇 试验研究
第一章 体内、外大鼠心肌细胞热应激模型建立及热应激性损伤特点
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 试验动物及细胞
1.1.2 器材与设备
1.1.3 主要试剂
1.1.4 主要溶液配制
1.2 方法
1.2.1 在体实验动物分组及取样
1.2.2 离体实验细胞分组及取样
1.2.3 HE染色
1.2.4 MTT试验
2 结果
2.1 受试大鼠的临床症状
2.2 热应激对H9C2离体大鼠心肌细胞活力及存活率的影响
2.3 在体和离体大鼠心肌细胞在热应激状态下的组织病理学变化
2.4 热应激导致的死亡大鼠心肌细胞的病理学变化
3 讨论
参考文献
第二章 热应激状态下Hsp60在大鼠离体和在体心肌细胞中的表达与定位
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 试验动物及细胞
1.1.2 器材与设备
1.1.3 主要试剂
1.1.4 主要溶液配制
1.1.5 分析工具软件
1.2 方法
1.2.1 在体实验动物分组及取样
1.2.2 离体实验细胞分组及取样
1.2.3 Westem blot检测
1.2.4 荧光定量PCR检测
1.2.5 免疫组织化学方法检测Hsp60蛋白在热应激大鼠心肌细胞中的表达
1.2.6 间接免疫荧光检测Hsp60蛋白在热应激H9C2大鼠心肌细胞中的表达
2 结果
2.1 热应激大鼠体内、外心肌细胞Hsp60表达水平的变化
2.2 热应激大鼠体内、外心肌细胞hsp60 mRNA表达水平的变化
2.3 热应激大鼠体内、外心肌细胞内Hsp60的定位
2.4 热应激导致的死亡大鼠心肌细胞中Hsp60的表达
2.5 热应激4h后H9C2大鼠心肌细胞中Hsp60的定位
3 讨论
参考文献
第三章 热应激状态下Hsp60相关蛋白Hsp10在大鼠心肌细胞中的表达与定位
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 试验动物及细胞
1.1.2 器材与设备
1.1.3 主要试剂
1.2 方法
1.2.1 在体实验试验分组及取样
1.2.2 离体实验分组及取样
1.2.3 Western blot检测
1.2.4 荧光定量PCR检测
1.2.5 间接免疫荧光测Hsp10蛋白在热应激H9C2大鼠心肌细胞中的表达
1.2.6 软件统计分析
2 结果
2.1 热应激大鼠心肌细胞Hsp10蛋白表达水平的变化
2.2 热应激大鼠心肌细胞hsp10 mRNA表达水平的变化
2.3 热应激处理的H9C2大鼠心肌细胞系Hsp10蛋白的定位结果
2.4 大鼠组织细胞中Hsp60和Hsp10的相关性分析
3 讨论
参考文献
第四章 细胞外的Hsp60对热应激处理H9C2心肌细胞的保护效应及其机理的初步研究
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验用细胞
1.1.2 器材与设备
1.1.3 主要试剂
1.1.4 主要溶液的配制
1.2 方法
1.2.1 H9C2大鼠心肌细胞上清液中Hsp60的检测
1.2.2 MAPK通路相关蛋白ERK、JNK抑制剂浓度的选择
1.2.3 流式细胞术检测心肌细胞的损伤
1.2.4 Western Blotting
1.2.5 荧光定量
2 结果
2.1 H9C2大鼠心肌细胞上清液中Hsp60的检测
2.2 抑制剂PD98059和SP600125浓度的筛选
2.3 热应激对H9C2心肌细胞凋亡和坏死的影响
2.4 抑制细胞膜外的Hsp60对热应激H9C2心肌细胞损伤及相关基因的影响
2.4.1 抑制细胞膜外的Hsp60对热应激H9C2细胞损伤的影响
2.4.2 抑制细胞膜外的Hsp60对热应激H9C2心肌细胞损伤相关基因的影响
2.5 抑制ERK和JNK的活化对热应激H9C2细胞损伤的影响
2.6 热应激对H9C2心肌细胞ERK和JNK蛋白磷酸化的影响
2.6.1 热应激对H9C2心肌细胞ERK和JNK蛋白磷酸化的影响
2.6.2 热应激对抑制了细胞外的Hsp60后的H9C2心肌细胞ERK和JNK蛋白磷酸化的影响
2.7 抑制细胞外的Hsp60对热应激H9C2细胞ERK和JNK蛋白磷酸化的影响
2.8 抑制细胞外的Hsp60及MAPK相关蛋白对热应激H9C2细胞内Hsp60及其相关蛋白Hsp10的影响
2.8.1 MAPK抑制剂对热应激H9C2细胞内Hsp60和Hsp10的影响
2.8.2 抑制细胞膜外的Hsp60对热应激H9C2细胞内Hsp60和Hsp10的影响
3 讨论
参考文献
全文总结
本文创新点
致谢
攻读博士学位期间发表的论文
本文编号：3809609
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3809609.html
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