H9N2亚型禽流感病毒遗传演化分析及细胞灭活苗初步研制
发布时间：2023-05-08 03:45
H9N2亚型禽流感病毒作为最主要的低致病性禽流感毒株广泛流行于我国,对养禽业造成了巨大的经济损失。此外,该病毒还具有直接感染人、或为高致病性禽流感病毒H5N1以及新型H7N9亚型禽流感病毒提供内部基因的能力,从而感染人,严重威胁着公共卫生安全,更加引起人们对H9N2亚型禽流感病毒关注。 为了研究H9N2亚型禽流感病毒对哺乳动物的致病力,对实验室分离到的19株H9N2亚型禽流感病毒进行了病毒纯化,并用纯化后的病毒滴鼻感染BALB/c小鼠,每株病毒感染6只,感染剂量106EID50/只。结果发现,随着年份的推移该H9N2亚型禽流感病毒的致病力有所改变,2012年分离的毒株虽然总的感染量低于2010-2011年份的毒株,但仍有较高致病力的毒株存在。 为了研究H9N2亚型禽流感病毒在基因水平上的遗传演化趋势,及其与新型H7N9禽流感、高致病性禽流感病毒基因序列的联系,本试验对上述19株H9N2亚型禽流感病毒及实验室已测序的26株病毒进行遗传演化分析。HA基因演化分析显示,45株H9N2亚型禽流感病毒主要属于Ck/BJ/1/94分支,而在这个大分支里有多达34株病毒都划分到了未有文献报道的第三小...
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
目录
摘要
前言
1 H9N2亚型禽流感病毒
2 禽流感的历史发展
3 禽流感病毒的结构组成
4 禽流感病毒致病性的分子基础
4.1 HA基因
4.2 NA基因
4.3 NP基因
4.4 M基因
4.5 NS基因
4.6 聚合酶蛋白
5 A型流感反向遗传操作系统
6 禽流感灭活苗的研究进展
7 本研究的目的和意义
第一章 H9N2亚型禽流感病毒的纯化及对BALB/c小鼠的致病性研究
1 材料与方法
1.1 病毒分离株
1.2 SPF鸡胚及试验动物
1.3 主要试剂和仪器
1.4 血凝(HA)试验
1.5 病毒的有限稀释法纯化及EID50测定
1.6 滴鼻感染BALB/c小鼠
1.7 脏器病毒含量的滴定
2 结果
2.1 病毒纯化的结果
2.2 19株H9N2亚型禽流感病毒EID50结果
2.3 19株H9N2亚型禽流感病毒BALB/c小鼠脏器的分离结果
2.4 BALB/c小鼠接毒H9N2流感病毒后的临床症状
3 分析与讨论
第二章 H9N2亚型禽流感病毒全基因组测序及遗传分析
1 材料与方法
1.1 试验用毒株
1.2 参考毒株
1.3 主要试剂与仪器
1.4 PCR及测序用引物
1.5 RNA的提取
1.6 反转录
1.7 目的片段的获得及测序
1.8 序列拼接与分析
2 结果
2.1 PCR结果
2.2 HA基因的遗传演化
2.3 NA基因的遗传演化
2.4 PB2基因的遗传演化
2.5 PB1基因的遗传演化
2.6 PA基因的遗传演化
2.7 NP基因的遗传演化
2.8 M基因的遗传演化
2.9 NS基因的遗传演化
3 分析与讨论
第三章 H9N2亚型禽流感病毒细胞苗的初步研制及其对鸡的免疫效果评估
1 材料与方法
1.1 毒株及细胞
1.2 SPF鸡胚及试验动物
1.3 主要试剂与仪器
1.4 种毒的扩增
1.5 TCID50的测定
1.6 H9N2亚型禽流感病毒在转瓶细胞上增殖条件的优化
1.7 疫苗的制备
1.8 最小免疫剂量
2 结果
2.1 SH441HANAPR8(NS mutant)病毒TCID50的测定结果
2.2 病毒感染剂量的测定结果
2.3 接毒后维持液的测定结果
2.4 转瓶接毒后维持液终体积确定
2.5 灭活剂的优化条件
2.6 最小免疫剂量的结果
3 分析与讨论
结论
参考文献
Abstract
附录
在读期间发表论文
致谢
本文编号：3811920
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
目录
摘要
前言
1 H9N2亚型禽流感病毒
2 禽流感的历史发展
3 禽流感病毒的结构组成
4 禽流感病毒致病性的分子基础
4.1 HA基因
4.2 NA基因
4.3 NP基因
4.4 M基因
4.5 NS基因
4.6 聚合酶蛋白
5 A型流感反向遗传操作系统
6 禽流感灭活苗的研究进展
7 本研究的目的和意义
第一章 H9N2亚型禽流感病毒的纯化及对BALB/c小鼠的致病性研究
1 材料与方法
1.1 病毒分离株
1.2 SPF鸡胚及试验动物
1.3 主要试剂和仪器
1.4 血凝(HA)试验
1.5 病毒的有限稀释法纯化及EID50测定
1.6 滴鼻感染BALB/c小鼠
1.7 脏器病毒含量的滴定
2 结果
2.1 病毒纯化的结果
2.2 19株H9N2亚型禽流感病毒EID50结果
2.3 19株H9N2亚型禽流感病毒BALB/c小鼠脏器的分离结果
2.4 BALB/c小鼠接毒H9N2流感病毒后的临床症状
3 分析与讨论
第二章 H9N2亚型禽流感病毒全基因组测序及遗传分析
1 材料与方法
1.1 试验用毒株
1.2 参考毒株
1.3 主要试剂与仪器
1.4 PCR及测序用引物
1.5 RNA的提取
1.6 反转录
1.7 目的片段的获得及测序
1.8 序列拼接与分析
2 结果
2.1 PCR结果
2.2 HA基因的遗传演化
2.3 NA基因的遗传演化
2.4 PB2基因的遗传演化
2.5 PB1基因的遗传演化
2.6 PA基因的遗传演化
2.7 NP基因的遗传演化
2.8 M基因的遗传演化
2.9 NS基因的遗传演化
3 分析与讨论
第三章 H9N2亚型禽流感病毒细胞苗的初步研制及其对鸡的免疫效果评估
1 材料与方法
1.1 毒株及细胞
1.2 SPF鸡胚及试验动物
1.3 主要试剂与仪器
1.4 种毒的扩增
1.5 TCID50的测定
1.6 H9N2亚型禽流感病毒在转瓶细胞上增殖条件的优化
1.7 疫苗的制备
1.8 最小免疫剂量
2 结果
2.1 SH441HANAPR8(NS mutant)病毒TCID50的测定结果
2.2 病毒感染剂量的测定结果
2.3 接毒后维持液的测定结果
2.4 转瓶接毒后维持液终体积确定
2.5 灭活剂的优化条件
2.6 最小免疫剂量的结果
3 分析与讨论
结论
参考文献
Abstract
附录
在读期间发表论文
致谢
本文编号：3811920
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