绵羊原代Cajal间质细胞的分离培养与鉴定

发布时间：2023-05-10 18:55

　　采集美利奴绵羊的十二指肠,在解剖显微镜下剥去黏膜层及黏膜下层,剪碎后采用Ⅱ型胶原酶和胰酶消化并分离获得绵羊十二指肠原代Cajal间质细胞(ICC);传代培养后,通过倒置显微镜观察不同时间的细胞形态,使用反转录PCR和免疫荧光染色检测ICC特异性标记物c-Kit。结果显示,成功分离了ICC,且细胞在培养24 h后贴壁,呈现出其固有的形态。RT-PCR检测c-kit基因为阳性,免疫荧光染色鉴定ICC表达c-Kit蛋白。本试验成功分离ICC且传代后细胞稳定增殖生长,为后期开展病原微生物导致ICC改变造成胃肠道炎性病变提供材料。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验样品
    1.2 试剂和仪器
    1.3 ICC的分离与培养
        1.3.1 ICC的分离
        1.3.2 ICC的换液及传代
    1.4 ICC的鉴定
        1.4.1 ICC的总RNA提取及反转录
        1.4.2 引物设计
        1.4.3 c-kit基因检测
        1.4.4 免疫荧光染色
2 结果
    2.1 ICC分离培养及形态特征
    2.2 RT-PCR检测c-kit基因表达情况
    2.3 免疫荧光染色检测c-Kit蛋白表达情况
3 讨论
    3.1 ICC分类及功能
    3.2 ICC分离及鉴定方法
    3.3 ICC分离培养时注意事项



本文编号：3813312