胎衣不下奶牛胎盘组织差异表达蛋白的筛选与鉴定

发布时间：2023-05-18 05:33

　　奶牛胎衣不下（Retained fetal membranes,RFM）是一种常见危害奶牛健康的繁殖障碍性疾病，引起该病的病因复杂，影响因素较多，但其发生的关键机制，特别是疾病发生的分子基础至今尚不明确，直接影响该病的防治效果。比较蛋白质组学和生物信息学技术为全面系统的研究奶牛胎衣不下发生过程中靶器官胎盘组织差异表达蛋白质，发现致病的主要分子提供了方法学保障。本项目用以上技术对健康及胎衣不下奶牛胎盘组织差异表达蛋白质进行筛选、鉴定与验证，寻找引起该病发生发展的关键蛋白质，揭示其致病作用和途径，为阐明奶牛胎衣不下发病分子机制和筛选早期临床诊断标志物提供理论依据。 本实验收集胎衣不下奶牛及胎衣正常脱落奶牛胎盘组织各3份，应用双向凝胶电泳技术对胎盘组织中蛋白进行分离，银染显色获得差异表达蛋白点，并用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术对其进行鉴定。同时对所得到的的差异表达蛋白进行生物信息学分析及荧光定量验证。 本实验获得胎衣不下奶牛胎盘组织的双向电泳图谱，在胎儿胎盘中筛选出240个差异表达蛋白点，其中表达上调蛋白点数为212个，表达下调蛋白点数为28个；母体胎盘中差异表达蛋白点数共有214个...

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
符号说明
目录
第一章 文献综述
    1.1 引言
    1.2 奶牛胎衣不下的的研究现状
        1.2.1 奶牛胎衣不下的临床症状
        1.2.2 奶牛胎衣不下的发病机理
        1.2.3 奶牛胎衣不下的治疗
        1.2.4 存在的问题
    1.3 蛋白质组学的研究现状
        1.3.1 蛋白质组学的研究技术平台
        1.3.2 双向凝胶电泳与 MALDI-TOF-MS 技术
    1.4 蛋白质组学的应用
        1.4.1 蛋白质组学在人类疾病中的应用
        1.4.2 蛋白质组学在动物方面的应用
        1.4.3 蛋白质组学在药物开发方面的应用
        1.4.4 蛋白质组学在胎盘方面的应用
第二章 胎衣不下奶牛胎盘组织差异表达蛋白的筛选
    2.1 材料
        2.1.1 实验试剂
        2.1.2 主要仪器设备
    2.2 方法
        2.2.1 实验动物的分组和处理
        2.2.2 样品制备
        2.2.3 差异表达蛋白的筛选
        2.2.4 部分差异表达蛋白的鉴定
    2.3 结果与分析
        2.3.1 样品蛋白含量的测定
        2.3.2 胎衣不下奶牛胎盘组织差异表达蛋白的分离
        2.2.3 部分差异表达蛋白位点的 SELDI-TOF-MS 鉴定
    2.4 讨论
第三章 部分差异表达蛋白的生物信息学分析
    3.1 实验内容
        3.1.1 部分差异表达蛋白的 GO 分析
        3.1.2 部分差异表达蛋白的 KEGG 数据库分析
    3.2 实验结果
        3.2.1 部分差异表达蛋白的 GO 分析结果
        3.2.2 差异表达蛋白的 KEGG 分析结果
    3.3 分析与讨论
        3.3.1 血凝反应与奶牛胎衣不下的关系
        3.3.2 炎症反应与奶牛胎衣不下的关系
        3.3.3 机体氧化应激作用与奶牛胎衣不下的关系
        3.3.4 营机体养代谢与胎衣不下的关系
第四章 差异表达蛋白的实时荧光定量 PCR 验证
    4.1 材料与仪器
        4.1.1 试验材料
        4.1.2 主要仪器
    4.2 试验方法
        4.2.1 奶牛胎盘组织中总 RNA 的提取
        4.2.2 胎盘组织 cDNA 的合成
        4.2.3 胎盘差异表达蛋白的实时荧光定量 PCR
    4.3 结果
        4.3.1 总 RNA 提取与质量检测
        4.3.2 部分差异表达蛋白点 mRNA 的相对表达
    4.4 讨论
第五章 结论
附录
参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3818774