miR-3880靶向OGR1对奶山羊乳腺上皮细胞调控作用的研究
发布时间：2023-05-19 03:13
乳腺是奶山羊的泌乳器官,在分子水平研究乳腺的调控机理是国内外的研究热点。已有研究表明,miRNA对乳腺的发育和泌乳性能的调控具有重要作用。本实验室在前期通过基因测序发现,miR-3880在奶山羊乳腺发育和泌乳中差异表达,但目前尚未有关miR-3880调控奶山羊乳腺发育和泌乳的试验研究。本研究以奶山羊乳腺上皮细胞为研究对象,利用生物信息学软件预测、RT-qPCR、Western blot分析和双荧光素酶报告载体构建等方法,研究miR-3880在奶山羊乳腺上皮细胞中对靶基因OGR1的调控作用;采用siRNA干扰技术研究靶基因OGR1对奶山羊乳腺上皮细胞的调控作用,以期阐明mi R-3880及其靶基因OGR1对奶山羊乳腺上皮细胞生长及泌乳的调控作用机制,为奶山羊泌乳调控提供试验依据。主要研究结果如下:1.奶山羊乳腺上皮细胞中miR-3880对OGR1基因的调节作用利用靶基因预测软件发现,OGR1的3′UTR区含有miR-3880的靶向结合位点。构建OGR1-3′UTR的双荧光素酶报告载体,分别将miRNA的模拟物(mimics)与报告载体共转到293T细胞中,检测荧光素酶的活性。结果表明,m...
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 文献综述
1.1 奶山羊乳腺调控机理的研究意义
1.2 奶山羊乳腺发育的研究进展
1.2.1 乳腺的发育及泌乳机理
1.2.2 乳腺上皮细胞的简介
1.3 miRNA与乳腺发育
1.3.1 miRNA的作用机制
1.3.2 miRNA靶基因的鉴定方法
1.3.3 miRNA对乳腺发育的调控
1.3.4 miRNA对泌乳功能的调控作用
1.4 RNA干扰技术的研究进展
1.5 OGR1基因的研究进展
1.6 本研究的目的和意义
1.7 研究思路及技术路线
试验研究
第二章 miR-3880对OGR1基因调控作用的研究
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 样品采集
2.2.2 主要仪器设备
2.2.3 主要试验试剂
2.2.4 miR-3880靶基因的预测
2.2.5 双荧光素酶报告载体和突变载体的构建
2.2.6 化学合成miRNA模拟物
2.2.7 293 T细胞共转染及荧光素酶活性检测
2.2.8 奶山羊乳腺上皮细胞转染
2.2.9 Realtime-qPCR
2.2.10 WesternBlot检测
2.2.11 数据统计分析
2.3 结果分析
2.3.1 miR-3880靶基因的生物信息预测
2.3.2 OGR1-3′UTR区的克隆
2.3.3 双荧光素酶报告载体构建
2.3.4 突变双荧光素酶报告载体的构建
2.3.5 荧光素酶活性的检测分析
2.3.6 miR-3880对OGR1基因在mRNA水平的影响
2.3.7 miR-3880对OGR1基因在蛋白水平的影响
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 OGR1对奶山羊乳腺上皮细胞调控作用的研究
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 样品的采集
3.2.2 主要仪器设备
3.2.3 主要试验试剂
3.2.4 流式细胞术检测细胞凋亡
3.2.5 CCK8法检测细胞增殖
3.2.6 ELISA试剂盒检测细胞中β-酪蛋白的合成
3.2.7 甘油三酯酶法检测试剂盒检测细胞中甘油三酯的合成
3.2.8 数据统计分析
3.3 结果分析
3.3.1 OGR1干扰效率检测
3.3.2 OGR1干扰后对乳腺上皮细胞生长发育的影响
3.3.3 OGR1干扰后对乳腺上皮细胞泌乳功能的影响
3.4 讨论
3.4.1 OGR1对奶山羊乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响
3.4.2 OGR1对奶山羊乳腺上皮细胞泌乳成分的调节
3.5 小结
研究结论
创新点
进一步研究的问题
参考文献
附录
致谢
作者简介
本文编号：3819541
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 文献综述
1.1 奶山羊乳腺调控机理的研究意义
1.2 奶山羊乳腺发育的研究进展
1.2.1 乳腺的发育及泌乳机理
1.2.2 乳腺上皮细胞的简介
1.3 miRNA与乳腺发育
1.3.1 miRNA的作用机制
1.3.2 miRNA靶基因的鉴定方法
1.3.3 miRNA对乳腺发育的调控
1.3.4 miRNA对泌乳功能的调控作用
1.4 RNA干扰技术的研究进展
1.5 OGR1基因的研究进展
1.6 本研究的目的和意义
1.7 研究思路及技术路线
试验研究
第二章 miR-3880对OGR1基因调控作用的研究
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 样品采集
2.2.2 主要仪器设备
2.2.3 主要试验试剂
2.2.4 miR-3880靶基因的预测
2.2.5 双荧光素酶报告载体和突变载体的构建
2.2.6 化学合成miRNA模拟物
2.2.7 293 T细胞共转染及荧光素酶活性检测
2.2.8 奶山羊乳腺上皮细胞转染
2.2.9 Realtime-qPCR
2.2.10 WesternBlot检测
2.2.11 数据统计分析
2.3 结果分析
2.3.1 miR-3880靶基因的生物信息预测
2.3.2 OGR1-3′UTR区的克隆
2.3.3 双荧光素酶报告载体构建
2.3.4 突变双荧光素酶报告载体的构建
2.3.5 荧光素酶活性的检测分析
2.3.6 miR-3880对OGR1基因在mRNA水平的影响
2.3.7 miR-3880对OGR1基因在蛋白水平的影响
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 OGR1对奶山羊乳腺上皮细胞调控作用的研究
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 样品的采集
3.2.2 主要仪器设备
3.2.3 主要试验试剂
3.2.4 流式细胞术检测细胞凋亡
3.2.5 CCK8法检测细胞增殖
3.2.6 ELISA试剂盒检测细胞中β-酪蛋白的合成
3.2.7 甘油三酯酶法检测试剂盒检测细胞中甘油三酯的合成
3.2.8 数据统计分析
3.3 结果分析
3.3.1 OGR1干扰效率检测
3.3.2 OGR1干扰后对乳腺上皮细胞生长发育的影响
3.3.3 OGR1干扰后对乳腺上皮细胞泌乳功能的影响
3.4 讨论
3.4.1 OGR1对奶山羊乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响
3.4.2 OGR1对奶山羊乳腺上皮细胞泌乳成分的调节
3.5 小结
研究结论
创新点
进一步研究的问题
参考文献
附录
致谢
作者简介
本文编号：3819541
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