NDRG1对奶牛乳腺上皮细胞增殖和乳脂分泌的影响及作用机制

发布时间：2023-05-20 04:51

　　奶牛乳腺炎是由环境变化引发奶牛机体状态发生改变、乳腺机械损伤以及环境病原微生物接触感染等多种因素引起的奶牛常见的临床疾病之一。目前,最常见的原因是金黄色葡萄球菌和大肠杆菌这两种病原微生物的入侵。乳腺组织被感染后,炎症的侵袭会使乳腺上皮细胞的增殖活力以及泌乳能力都会受到影响,给奶牛养殖业带来巨大的经济损失。目前已有大量研究表明分化相关基因1(N-myc downstream regulated gene 1,NDRG1)与多种肿瘤疾病相关,参与了炎性肿瘤微环境的调控,但NDRG1是否在奶牛乳腺炎的发生过程中发挥功能尚未见报道。对试验前期高通量测序的结果分析后发现,NDRG1在热灭活的大肠杆菌(ATCC25922)和金黄色葡萄球菌(ATCC29213)诱导的炎性奶牛乳腺上皮细胞中相对于正常乳腺上皮细胞呈现高表达。首先通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-q PCR)和蛋白免疫印记技术(western blot)对测序结果进行验证,结果显示NDRG1基因和蛋白在热灭活的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的的诱导下表达量均上升。另外,采用RT-q PCR的方法检测了NDRG1在炎性乳腺组织和正常乳腺组织...

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要符号对照表
第一章 引言
    1.1 奶牛乳腺炎的研究进展
        1.1.1 奶牛乳腺炎的临床特征
        1.1.2 奶牛乳腺炎的致病原因
        1.1.3 奶牛乳腺炎的危害
        1.1.4 奶牛乳腺炎的防治
    1.2 奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)的研究进展
        1.2.1 MAC-T的建立
        1.2.2 MAC-T细胞的功能研究
    1.3 NDRG1 基因的研究进展
        1.3.1 NDRG1 概述
        1.3.2 NDRG1 与细胞增殖
        1.3.3 NDRG1 与炎性免疫应答
        1.3.4 NDRG1 与细胞内物质合成
        1.3.5 NDRG1与mTOR信号通路
    1.4 n-3 多不饱和脂肪酸的研究进展
        1.4.1 n-3 多不饱和脂肪酸概述
        1.4.2 n-3PUFA与炎症
        1.4.3 n-3PUFA与脂代谢
第二章 NDRG1对奶牛乳腺上皮细胞增殖和β-酪蛋白分泌的影响及机制
    2.1 材料
        2.1.1 乳腺组织和细胞
        2.1.2 试剂
        2.1.3 仪器设备
        2.1.4 主要试剂配制
    2.2 方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 体外建立炎性奶牛乳腺上皮细胞模型
        2.2.3 实时荧光定量PCR检测
        2.2.4 蛋白免疫印迹试验
        2.2.5 高通量测序
        2.2.6 过表达和干扰NDRG1 细胞系的建立
        2.2.7 细胞活力测定
        2.2.8 细胞迁移试验
        2.2.9 酶联免疫吸附试验
        2.2.10 甘油三酯(TG)含量测定
        2.2.11 统计分析
    2.3 结果
        2.3.1 高通量测序结果中NDRG1 基因的表达
        2.3.2 NDRG1 在乳腺炎细胞模型中的表达
        2.3.3 NDRG1 在奶牛乳腺组织中的表达
        2.3.4 过表达NDRG1 稳转细胞系的建立
        2.3.5 干扰NDRG1 稳转细胞系的建立
        2.3.6 NDRG1对MAC-T细胞系促炎性细胞因子和趋化因子表达量的影响
        2.3.7 NDRG1对MAC-T细胞系增殖和迁移能力的影响
        2.3.8 NDRG1对MAC-T细胞系泌乳能力的影响
        2.3.9 NDRG1 通过mTOR通路发挥功能
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 n-3PUFA与NDRG1对奶牛乳腺上皮细胞泌乳功能的影响
    3.1 材料
        3.1.1 细胞
        3.1.2 试剂
        3.1.3 仪器设备
    3.2 方法
        3.2.1 细胞培养
        3.2.2 细胞毒性试验
        3.2.3 实时荧光定量PCR
        3.2.4 酶联免疫吸附试验
        3.2.5 甘油三酯测定
        3.2.6 统计分析
    3.3 结果
        3.3.1 n-3PUFA浓度对MAC-T细胞的毒性探究
        3.3.2 n-3PUFA对 MAC-T细胞系NDRG1 基因表达量的影响
        3.3.3 n-3PUFA与 NDRG1对MAC-T细胞系促炎性细胞因子表达量的影响
        3.3.4 n-3PUFA与 NDRG1对MAC-T细胞系β-酪蛋白分泌的影响
        3.3.5 n-3PUFA与 NDRG1对MAC-T细胞系甘油三酯分泌的影响
    3.4 讨论
    3.5 小结
全文结论
创新之处
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3820574