犬新孢子虫特异基因筛

发布时间：2023-05-21 22:46

　　本研究以新孢子虫和弓形虫为研究对象，采用抑制差减杂交技术对新孢子虫和弓形虫差异表达基因进行分析，以期找到新孢子虫特异基因以建立其检测方法。首先采用SSH技术构建新孢子虫和弓形虫的差减文库，然后经生物信息学分析获得新孢子虫特异基因。结果表明从新孢子虫和弓形虫的差减文库获得新孢子虫特异基因74个。利用NCLIV₀04830、表面蛋白NcMIC6和通过分析新孢子虫基因组获得的NcP40共3个基因分别建立了新孢子虫特异检测方法并应用这些方法进行了新孢子虫病流行病学调查。 用SSH技术筛选到的特异基因NCLIV₀04830部分片段为目标DNA，设计一对新孢子虫nested-PCR特异引物，建立新孢子虫特异nested-PCR检测方法并对反应条件进行优化。并用该方法对沈阳地区犬新孢子虫病进行了流行病学调查。结果表明，nested-PCR灵敏度明显高于常规PCR，可检测到1个虫体基因组DNA。该方法特异性强，与Hammondia heydorni、弓形虫、犬囊等孢球虫无交叉反应。可用于新孢子虫速殖子、包囊、卵囊阶段的检测。用本研究建立的nested-PCR...

【文章页数】：130 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
内容提要
中文摘要
Abstract
前言
第一篇 文献综述
    第一章 新孢子虫与弓形虫差异研究进展
        1 新抱子虫和刚地弓形虫超微结构的比较
        2 交叉抗原及特异抗原的研究
        3 基因组差异比较
    第二章 新孢子虫检测方法研究进展
        1 免疫学方法
        2 分子生物学技术
第二篇 研究内容
    第一章 新孢子虫与弓形虫 SSH cDNA 文库的构建
        1 材料与方法
        2 结果
        3 讨论
        4 小结
    第二章 新孢子虫 nested-PCR 检测方法的建立
        1 材料与方法
        2 结果
        3 讨论
        4 小结
    第三章 新孢子虫 nested-PCR 检测方法应用及 ITS-1 基因系统发育分析
        1 材料与方法
        2 结果
        3 讨论
        4 小结
    第四章 新孢子虫表面抗原 NcP40 和 NcMIC6 原核表达
        1 材料与方法
        2 结果
        3 讨论
        4 小结
    第五章 牛新孢子虫NcP40-ELISA 和 NcMIC6-ELISA 检测方法建立73
        1 材料与方法
        2 结果
        3 讨论
        4 小结
    第六章 新孢子虫间接 NcP40-ELISA 检测方法应用
        1 材料与方法
        2 结果
        3 讨论
        4 小结
    结论
参考文献
附录
导师简介
作者简介
攻读博士期间的科研成果
致谢



本文编号：3821569