山羊骨髓间充质干细胞向生殖细胞体外转分化的初步研究
发布时间:2023-06-01 01:49
生殖细胞是遗传物质的传递者,人类和家畜优良性状的遗传都要通过生殖细胞来实现,因此生殖细胞的发生也就成为当前生殖生物学研究的热点之一。然而迄今为止,我们对生殖细胞发育和分化的了解还知之甚少,而干细胞为研究生殖细胞的发育提供了极为有利的工具。骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)是一群存在于骨髓中具有不断增殖和自我更新能力的成体干细胞,已在多个物种证明该类干细胞具有体外分化为3个胚层诸多细胞类型的能力,可见BMSCs在分化潜能上几乎可以与ES细胞相媲美。但与ES细胞相比,BMSCs具有取材方便、体外易培养、增殖快和免疫原性低等优点,是生殖细胞发育分化和基因表达调控的理想种子细胞之一。因此,本试验以体外分离培养的山羊BMSCs作为细胞模型,研究不同的外源因子(视黄酸RA和骨形态蛋白BMP4)和内源因子(DAZL基因)诱导BMSCs向早期生殖细胞发生转分化,为研究哺乳动物生殖细胞的发生及机理建立可靠的模型。本研究共分为三个部分,第一部分为RA和BMP4体外诱导山羊BMSCs向早期生殖细胞分化;第二部分为过表达DAZL基因体外诱导山羊BMSCs向早...
【文章页数】:85 页
【学位级别】:硕士
【文章目录】:
摘要
ABSTRACT
缩略词(Abbreviation)
引言
第一章 雄性生殖细胞的发生过程及内在机理的研究进展
1.1 研究生殖细胞的必要性
1.2 雄性生殖细胞的发生过程
1.3 性别确定,减数分裂和生殖细胞成熟
1.4 生殖细胞系的表观修饰学
1.5 RNA结合蛋白和小非编码RNA对转录后的调节
1.6 结论和展望
参考文献
第二章 干细胞向生殖细胞分化的研究进展
1.1 干细胞简介
1.2 ESCs或者iPSCs向生殖细胞分化的研究进展
1.3 成体干细胞向生殖细胞分化的进展
1.4 诱导分化的方法总结
1.4.1 RA的诱导
1.4.2 生长因子
1.4.3 模拟体内微环境
1.4.4 过表达相关基因
1.5 结论和展望
参考文献
第三章 RA和BMP4对山羊骨髓间充质干细胞向生殖细胞体外分化的影响
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 试验方法
2 结果与分析
2.1 RA的浓度的优化
2.2 BMP4浓度的优化
2.3 诱导前后细胞形态
2.4 不同的诱导组合后的基因表达检测
2.5 诱导过程中基因的表达情况
3 讨论
参考文献
第四章 过表达DAZL对山羊BMSCs向生殖细胞分化的影响
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验方法
2 结果
2.1 不同日龄的山羊睾丸组织DAZL的表达
2.2 体外转录mRNA的验证
2.3 过表达DAZL后对体外转分化的影响
2.4 DAZL敲低对RA诱导BMSCs体外分化的影响
4 讨论
参考文献
第五章 山羊早期生殖细胞特异报告载体pVASA-EGFP的构建及表达研究
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验方法
2 结果与分析
2.1 山羊VASA基因序列的扩增
2.2 pVASA-EGFP重组质粒的构建与鉴定
2.3 pVASA-EGFP重组质粒的转染及诱导后的荧光观察
3 讨论
参考文献
全文结论
创新点
附录
致谢
发表文章
本文编号:3826416
【文章页数】:85 页
【学位级别】:硕士
【文章目录】:
摘要
ABSTRACT
缩略词(Abbreviation)
引言
第一章 雄性生殖细胞的发生过程及内在机理的研究进展
1.1 研究生殖细胞的必要性
1.2 雄性生殖细胞的发生过程
1.3 性别确定,减数分裂和生殖细胞成熟
1.4 生殖细胞系的表观修饰学
1.5 RNA结合蛋白和小非编码RNA对转录后的调节
1.6 结论和展望
参考文献
第二章 干细胞向生殖细胞分化的研究进展
1.1 干细胞简介
1.2 ESCs或者iPSCs向生殖细胞分化的研究进展
1.3 成体干细胞向生殖细胞分化的进展
1.4 诱导分化的方法总结
1.4.1 RA的诱导
1.4.2 生长因子
1.4.3 模拟体内微环境
1.4.4 过表达相关基因
1.5 结论和展望
参考文献
第三章 RA和BMP4对山羊骨髓间充质干细胞向生殖细胞体外分化的影响
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 试验方法
2 结果与分析
2.1 RA的浓度的优化
2.2 BMP4浓度的优化
2.3 诱导前后细胞形态
2.4 不同的诱导组合后的基因表达检测
2.5 诱导过程中基因的表达情况
3 讨论
参考文献
第四章 过表达DAZL对山羊BMSCs向生殖细胞分化的影响
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验方法
2 结果
2.1 不同日龄的山羊睾丸组织DAZL的表达
2.2 体外转录mRNA的验证
2.3 过表达DAZL后对体外转分化的影响
2.4 DAZL敲低对RA诱导BMSCs体外分化的影响
4 讨论
参考文献
第五章 山羊早期生殖细胞特异报告载体pVASA-EGFP的构建及表达研究
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验方法
2 结果与分析
2.1 山羊VASA基因序列的扩增
2.2 pVASA-EGFP重组质粒的构建与鉴定
2.3 pVASA-EGFP重组质粒的转染及诱导后的荧光观察
3 讨论
参考文献
全文结论
创新点
附录
致谢
发表文章
本文编号:3826416
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