肠出血性大肠杆菌O157多重PCR检测方法的建立

发布时间：2023-06-01 22:59

　　为了建立肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157的多重PCR检测方法,本研究选取调控基因fusR与n5512,联合经典的rfbE、stx1和stx2基因,共同作为靶基因,通过对引物浓度等参数优化,建立了稳定性好的检测EHEC O157的多重PCR方法。并检测了该方法的特异性与敏感性,结果显示,该方法对非O157的产志贺毒素的大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、沙门氏菌、假结核耶尔森菌等检测均为阴性,特异性强;对EHEC基因组DNA的检测下限约为2.27×10^-2ng/μL,对EHEC CFU的检测下限约为104cfu/mL。对人工感染菌的样品进行检测,增菌前与增菌后的检测限分别为:饲料,4×10³cfu/g和4×10^-4cfu/g;土壤,4×103cfu/g和4×10^-2cfu/g;牛肉,8×10-1cfu/g和8×10-3cfu/g;废水,4×103cfu/g和4×10^-3cfu/g。该方法还能检出感染了EHEC O157小鼠的粪便。综上,本研究建立了一种优化的EHEC O1...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株与实验动物
    1.2 主要试剂
    1.3 引物的设计与合成
    1.4 基因组DNA的制备
    1.5 多重PCR反应条件的优化
    1.6多重PCR特异性试验
    1.7 多重PCR敏感性试验
        1.7.1以细菌培养物为模板的多重PCR敏感性试验
        1.7.2以基因组DNA为模板的多重PCR敏感性试验
    1.8 多重PCR的重复性试验
    1.9 多重PCR方法对人工染菌样品中EHEC O157的检测
        1.9.1饲料、土壤、牛肉、废水样品集菌后与增菌后的多重PCR检测
        1.9.2粪便样品集菌后与增菌后的多重PCR检测
        1.9.3样品检测限的计算
2 结果
    2.1 多重PCR反应优化结果
    2.2 多重PCR特异性试验结果
    2.3 多重PCR敏感性试验结果
        2.3.1以细菌培养物为模板的多重PCR敏感性试验结果
        2.3.2以基因组DNA为模板的多重PCR敏感性试验结果
    2.4 多重PCR重复性试验结果
    2.5 人工染菌样品中EHEC O157的检测
3 讨论



本文编号：3827190