猪圆环病毒3型实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

发布时间：2023-06-15 19:13

　　为建立快速、灵敏且特异的检测猪圆环病毒3型(porcine circovirus, PCV)的实时荧光定量PCR方法,本研究根据ORF2基因的保守序列设计一对特异性引物和TaqMan探针,通过构建标准品质粒来制作荧光定量PCR标准曲线,优化反应条件,验证敏感性、特异性及重复性,建立了检测PCV3的实时荧光定量PCR方法。结果显示,该方法可以特异性检测出PCV3,而对猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪细小病毒、伪狂犬病毒等检测结果均为阴性,表明其具有良好的特异性。用构建的标准品质粒测得的灵敏度可以达到10 copies/μL,重复试验批内及批间变异系数均小于2%,表明其具有良好的灵敏性和重复性。以上结果表明,本研究建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏性高、特异性强的优点,可为我国PCV3型的早期检测及相关研究工作提供可靠的技术支持。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 病料及阳性质粒来源
    1.2 主要试剂及仪器
    1.3 引物的设计与合成
    1.4 质粒标准品DNA模板的制备
    1.5 TaqMan荧光定量PCR反应条件的优化
    1.6 标准曲线的建立及敏感性试验
    1.7 特异性试验
    1.8 重复性试验
    1.9 临床样本的检测
2 结果
    2.1 标准品质粒构建
    2.2 TaqMan荧光定量PCR反应条件的优化
    2.3 荧光定量 PCR 标准曲线的绘制
    2.4 特异性试验
    2.5 灵敏性试验
    2.6 重复性试验
    2.7 临床样本的检测
3 讨论



本文编号：3833501