奶牛乳房炎链球菌的分离鉴定及其多克隆抗体的制备

发布时间：2023-06-23 18:58

　　奶牛乳房炎是奶牛中最常见也是造成养殖损失最为严重的一种疾病,其中链球菌是导致奶牛乳房炎比较常见的一种病原菌,它包括乳房链球菌、停乳链球菌、无乳链球菌、兽疫链球菌和化脓性链球菌等在内的多种链球菌,它们不仅感染乳房腺体,还会造成奶牛乳腺组织的损伤或破坏,长期减少产奶量,甚至会造成乳区泌乳功能的丧失,使奶牛提前淘汰,给奶牛养殖业带来巨大的经济损失。本研究为了了解广西部分地区奶牛场乳房炎链球菌的流行情况,寻找对链球菌敏感的药物,同时制备抗链球菌多克隆抗体,以期为指导临床用药和快速诊断试剂盒及试纸条的研制提供参考而设计了本实验。 本实验从广西6个规模化奶牛场共采集患乳房炎的奶样75份,通过传统的病原微生物学、革兰氏染色与镜检、PCR以及生化实验等方法对乳房炎奶样中链球菌进行分离鉴定,并对感染链球菌的乳房炎的发生情况作了初步统计分析。随机抽取临床鉴定的链球菌菌株14株进行小白鼠攻毒实验,以不同浓度链球菌分3组分别攻毒14只昆明系小白鼠,另选6只小白鼠注射生理盐水为对照组,饲喂3d观察小白鼠的发病情况,并进行链球菌致病力的分析。用大黄、黄连、黄岑、五味子、金银花等11种中药进行单味药的药敏实验,同时...

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 引言
    1.2 乳房炎的发病原因及规律
        1.2.1 奶牛自身因素
        1.2.3 饲养管理不当
        1.2.4 季节差异
        1.2.5 病原微生物的感染
    1.3 链球菌性乳房炎
        1.3.1 环境链球菌性乳房炎
        1.3.2 无乳链球菌性乳房炎
        1.3.3 链球菌的流行病学
        1.3.4 链球菌的致病机理
        1.3.5 链球菌性乳房炎的临床症状
    1.4 链球菌性乳房炎的治疗进展
    1.5 链球菌多克隆抗体的基本原理
    1.6 本研究的内容、目的及意义
第二章 广西地区部分奶牛场乳房炎链球菌的分离鉴定
    2.1 材料
        2.1.1 乳样的来源与采集
        2.1.2 主要培养基与试剂
        2.1.3 主要仪器设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 链球菌的分离纯化
        2.2.2 链球菌的生化鉴定
        2.2.3 分子生物学鉴定
    2.3 结果与分析
        2.3.1 链球菌分离结果
        2.3.2 链球菌的形态观察
        2.3.3 链球菌在不同培养基上的生长特征
        2.3.4 链球菌的生化鉴定结果
        2.3.5 PCR鉴定结果
    2.4 讨论
        2.4.1 链球菌的检出和感染情况探讨
        2.4.2 链球菌分离鉴定
    2.5 小结
第三章 奶牛乳房炎链球菌的毒力性及敏感性实验
    3.1 材料
        3.1.1 实验菌株
        3.1.2 实验动物
        3.1.3 培养基、药品及主要试剂
        3.1.4 主要仪器设备
    3.2 方法
        3.2.1 链球菌的毒力性实验
        3.2.2 体外抑菌实验
    3.3 结果与分析
        3.3.1 链球菌毒力性实验的结果
        3.3.2 16种奶牛场治疗乳房炎药物的体外抑菌活性测定结果
        3.3.3 11种中草药提取物的MIC/MBC
    3.4 讨论
        3.4.1 链球菌的毒力与致病力对动物的影响
        3.4.2 链球菌的耐药性与药敏实验分析
    3.5 小结
第四章 乳房炎链球菌多克隆抗体的制备
    4.1 材料
        4.1.1 实验菌株
        4.1.2 实验动物
        4.1.3 主要试剂及配制
        4.1.4 主要仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 链球菌的抗原制备
        4.2.2 实验动物的免疫程序
        4.2.3 间接ELISA检测大白兔/大鼠血清中的抗体水平
        4.2.4 灵敏性实验
        4.2.5 交叉反应实验
        4.2.6 血清抗体的纯化
        4.2.7 清抗体蛋白浓度的测定
        4.2.8 清抗体蛋白的SDS-PAGE电泳
    4.3 结果
        4.3.1 链球菌抗原的制备结果
        4.3.2 血清抗体效价的ELISA检测条件优化结果
        4.3.3 大白兔与大鼠间血清的抗体效价
        4.3.4 链球菌多克隆抗体敏感性与交叉反应实验结果
        4.3.5 纯化后血清抗体蛋白浓度的测定结果
        4.3.6 抗血清SDS-PAGE电泳分析
    4.4 讨论
        4.4.1 制备高纯度链球菌多克隆抗体的主要因素
        4.4.2 抗血清间接ELISA优化条件的探讨
        4.4.3 多克隆抗体纯化的选择
    4.5 小结
结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的学术论文目录
附录



本文编号：3835138