沙咪珠利对柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子蛋白组的影响研究

发布时间：2023-06-23 20:03

　　鸡球虫病是一种由艾美尔属球虫引起的胞内寄生虫疾病,每年都会给养禽业造成巨大的经济损失。其中柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella,E.tenella)的致病性较强。在其第二代裂殖子阶段,滋养体复分裂形成裂殖体,进而产生大量裂殖子,对肠道造成不可逆损伤。因此,研究药物对第二代裂殖子时期的影响尤为重要。目前,E.tenella的防治主要依靠化学药物。沙咪珠利(Ethanamizuril)是上海兽医研究所兽用抗感染药物创新团队自主研发的一种新型三嗪类化合物,具有广谱、高效、低毒的特点。前期研究表明其抗球虫效果在第二代裂殖子时期最为显著。我们通过研究沙咪珠利对E.tenella第二代裂殖子蛋白组的影响,期望发现药物的作用分子以及潜在的耐药机制。结果如下:1.Label free蛋白质组学研究沙咪珠利对E.tenella第二代裂殖子蛋白表达水平的影响,筛选出具有药物效应的目标蛋白。液相色谱-质谱/串联质谱(LC-MS/MS)对蛋白进行鉴定和定量分析。采用基因本体论(Gene ontology,GO),京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 柔嫩艾美耳球虫概述
        1.1.1 简介
        1.1.2 发育史
        1.1.3 流行病学
        1.1.4 防治措施
    1.2 三嗪类药物的研究进展
        1.2.1 三嗪类药物的简介
        1.2.2 三嗪类药物作用机理的研究
    1.3 蛋白组学研究
    1.4 表面抗原的研究进展
    1.5 本研究的目的与意义
第二章 沙咪珠利抗E.tenella第二代裂殖子的蛋白组学研究
    2.1 材料
        2.1.1 主要仪器和主要试剂
        2.1.2 试验虫株及药物
    2.2 方法
        2.2.1 试验动物分组
        2.2.2 E.tenella第二代裂殖子的提取和纯化
        2.2.3 蛋白质样品制备
        2.2.4 酶解产物的LC-MS/MS分析
        2.2.5 Max Quant的非标记分析
        2.2.6 差异表达蛋白质筛选
        2.2.7 生物信息学分析
    2.3 结果
        2.3.1 质谱鉴定及差异表达蛋白的筛选
        2.3.2 GO分析
        2.3.3 KEGG信号通路富集分析
        2.3.4 PPI网络分析
    2.4 讨论
    2.5 本章小结
第三章 沙咪珠利对E.tenella第二代裂殖子差异表面抗原m RNA水平的影响
    3.1 材料
        3.1.1 主要仪器和试剂
        3.1.2 试验虫株和试验用药
    3.2 方法
        3.2.1 试验动物分组
        3.2.2 E.tenella第二代裂殖子的制备
        3.2.3 提取E.tenella第二代裂殖子的总RNA
        3.2.4 反转录m RNA合成c DNA的第一条链
        3.2.5 引物设计及Real-time PCR
    3.3 结果
        3.3.1 提取第二代裂殖子总RNA
        3.3.2 Real-time RCR分析
    3.4 讨论
    3.5 本章小结
第四章 E.tenella第二代裂殖子SAGfm1和SAGfm2 的克隆与表达
    4.1 材料
        4.1.1 主要仪器和试剂
    4.2 方法
        4.2.1 引物设计
        4.2.2 RT-PCR扩增
        4.2.3 表达质粒的构建与鉴定
        4.2.4 重组蛋白的诱导表达
        4.2.5 重组蛋白的纯化及鉴定
        4.2.6 多克隆抗体的制备
        4.2.7 检测重组蛋白制备多克隆抗体的特异性
    4.3 结果
        4.3.1 表达质粒的构建
        4.3.2 重组蛋白的诱导表达和纯化
        4.3.3 检测重组蛋白制备多克隆抗体的特异性
    4.4 讨论
    4.5 本章小结
第五章 沙咪珠利对E.tenella第二代裂殖子SAGfm1和SAGfm2 蛋白水平的影响
    5.1 材料
        5.1.1 主要仪器和试剂
    5.2 方法
        5.2.1 制备E.tenella第二代裂殖子
        5.2.2 提取E.tenella第二代裂殖子的总蛋白
        5.2.3 Western blot分析沙咪珠利对SAGfm1和SAGfm2 蛋白水平的影响
        5.2.4 E.tenella第二代裂殖子SAGfm1和SAGfm2 的免疫定位
    5.3 结果
        5.3.1 沙咪珠利对E.tenella第二代裂殖子SAGfm1和SAGfm2 蛋白水平的影响
        5.3.2 E.tenella第二代裂殖子SAGfm1和SAGfm2 的免疫定位
    5.4 讨论
    5.5 本章小结
第六章 全文结论
参考文献
附录 A
致谢
作者简历



本文编号：3835227