猪戊型肝炎病毒(HEV)RT-qRPA检测方法的建立及应用评价

发布时间：2023-08-11 16:15

　　为了建立一种快速、高效检验猪肝样品中猪戊型肝炎病毒(HEV)污染情况的新方法,即HEV实时荧光逆转录-重组酶聚合酶扩增(RT-qRPA)检测方法。参考TwistDx公司RPA技术说明,以基因4型猪HEV分离株的保守基因序列为模板设计合成特异性引物和EXO探针建立HEV RT-qRPA检测方法。以HEV国际检测金标准RT-qPCR方法为参照,对新建立的RT-qRPA检测方法的特异性、敏感性及可重复性进行对比验证评价,进一步通过对锦州市猪肝样品中HEV的污染情况进行对比检测分析,评估RT-qRPA检测方法的临床可靠性。结果显示,本研究所建立的RT-qRPA检测方法在39℃恒温条件下20 min即可检出阳性值,且特异性强、敏感性高,HEV RNA的最低检测限约17.7拷贝,与RT-qPCR标准参考方法相同。148份猪肝脏样品中HEV的阳性检出率为0.8%(1/148),与RT-qPCR方法的检出结果一致。本研究成功建立了HEV RT-qRPA检测方法,该方法敏感性高、特异性好、操作简单、反应快速,为下一步开发POCT便携检测设备应用于我国畜牧兽医基层工作的HEV检测提供了技术参考。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要试剂
    1.2 毒株及样品来源
    1.3 MS2-HEV质控品及质粒标准品的制备
    1.4 引物和探针的设计
    1.5 病毒RNA的提取
    1.6 参考实时荧光定量RT-PCR检测方法
    1.7 实时荧光定量RT-RPA检测方法的建立
    1.8 HEV RT-RPA方法特异性分析
    1.9 临床样本检测
2 结果
    2.1 RT-qRPA与RT-qPCR参考方法扩增标准曲线
    2.2 RT-qRPA的特异性试验结果
    2.3 临床样品的RT-qRPA与RT-qPCR检测一致性评价结果
3 讨论



本文编号：3841358