绵羊真皮间充质干/祖细胞的分离培养及生物学特性研究

发布时间：2023-08-11 11:50

　　间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells, MSCs)是近些年来国内外研究的热点,它具有自我增殖、免疫调控和多向诱导分化潜能。MSCs的研究主要集中在骨髓、脂肪、骨骼、肌肉、肺、胰腺、羊水和脐带血等组织中。真皮来源的干细胞的研究相对较少。目前为止,还未见关于绵羊胚胎真皮来源的MSCs生物学特性方面的研究报道。本试验以绵羊胚胎来源的真皮间充质干／祖细胞(Dermis-derived Mesenchymal Stem/progenitor Cells, DMS/PCs)为研究对象,对其进行分离、培养、生物学特性和多向诱导分化潜能及鉴定进行了初步探索和研究,得出了以下结论： 1.本试验设计了三种培养体系,并根据干细胞的生长和活性状况筛选出了胎羊真皮MSCs的最佳分离方法和培养体系：以30日龄绵羊胚胎背部皮肤组织为材料,用0.25%DispaseⅡ4℃消化过夜,用机械法将表皮层与真皮层分离,再用0.25%的胰酶消化真皮层20min获得DMS/PCs,体外最佳培养体系为：L-DMEM基础培养基+10%FBS+2mM L-谷氨酰胺+1%非必需氨基酸+100IU/mL青霉素+100...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 引言
    1.2 DMS/PCs的来源和发现
    1.3 DMS/PCs的生物学特性
        1.3.1 DMS/PCs的形态学特征
        1.3.2 DMS/PCs的增殖特性
    1.4 DMS/PCs的表面标记物
    1.5 DMS/PCs的分离培养
    1.6 DMS/PCs的体外诱导分化潜能
        1.6.1 DMS/PCs脂肪细胞诱导分化
        1.6.2 DMS/PCs成骨细胞诱导分化
        1.6.3 DMS/PCs神经元样细胞诱导分化
    1.7 应用前景
第二章 绵羊真皮间充质干/祖细胞分离、培养与鉴定
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验对象
        2.1.2 试验主要仪器和设备
        2.1.3 试验主要试剂和配制
    2.2 试验方法
        2.2.1 绵羊DMS/PCs的分离培养
        2.2.2 绵羊DMS/PCs培养体系的优化
        2.2.3 绵羊DMS/PCs的传代培养
        2.2.4 绵羊DMS/PCs的冻存与复苏
        2.2.5 绵羊DMS/PCs的表面标记物检测
    2.3 试验结果
        2.3.1 绵羊DMS/PCs的分离培养
        2.3.2 绵羊DMS/PCs培养体系优化
        2.3.3 绵羊DMS/PCs的传代培养
        2.3.4 绵羊DMS/PCs的冻存与复苏
        2.3.5 绵羊DMS/PCs表面标记物检测
    2.4 讨论
        2.4.1 绵羊DMS/PCs的分离培养
        2.4.2 绵羊DMS/PCs的鉴定
    2.5 本章小结
第三章 绵羊真皮间充质干/祖细胞的生物学特性研究
    3.1 试验材料
        3.1.1 试验对象
        3.1.2 试验主要仪器设备
        3.1.3 试验主要试剂及配制
    3.2 试验方法
        3.2.1 绵羊DMS/PCs冻存前后活率
        3.2.2 绵羊DMS/PCs生长曲线绘制
        3.2.3 绵羊DMS/PCs细胞周期检测
        3.2.4 绵羊DMS/PCs核型分析
        3.2.5 绵羊DMS/PCs诱导分化及鉴定
    3.3 结果与分析
        3.3.1 绵羊DMS/PCs冻存前后活率计算
        3.3.2 绵羊DMS/PCs生长曲线绘制
        3.3.3 绵羊DMS/PCs的细胞周期检测
        3.3.4 绵羊DMS/PCs的核型分析
        3.3.5 绵羊DMS/PCs的诱导分化及鉴定
    3.4 讨论
        3.4.1 绵羊DMS/PC生长和增殖特点
        3.4.2 绵羊DMS/PC核型分析
        3.4.3 绵羊DMS/PC诱导分化及鉴定
    3.5 本章小结
第四章 全文结论
参考文献
附录
致谢
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本文编号：3841269