抗犬细小病毒单克隆抗体的制备与鉴定

发布时间：2023-08-30 00:38

　　为制备针对犬细小病毒(CPV)的单克隆抗体,以纯化的CPV免疫BALB/c小鼠,3次免疫后,取其脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合。利用超速离心纯化的病毒作为包被抗原,采用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,获得3株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1D9、3G9和4F6。单克隆抗体细胞培养上清效价为1∶64、1∶64、1∶128,腹水效价为1∶10⁴、1∶10⁴、1∶10⁵。3株杂交瘤细胞的染色体数分别为92、94、98。亚类鉴定结果显示1D9和3G9重链为IgG1,4F6重链为IgG2b,轻链均为kappa链。病毒中和试验表明,单克隆抗体4F6对CPV具有明显的病毒中和活性。交叉试验表明,3株单克隆抗体均可与CPV特异性结合,与其他犬类常见病毒无交叉反应。本研究制备的单克隆抗体为CPV的检测及其感染动物的治疗提供了物质基础。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要材料
    1.2 动物免疫
    1.3 间接ELISA筛选方法的建立
    1.4 细胞融合与培养
    1.5 阳性杂交瘤细胞的筛选及亚克隆
    1.6 MAb腹水制备及抗体纯化
    1.7 MAb的中和活性鉴定
    1.8 MAb的鉴定
        1.8.1 效价的测定
        1.8.2 染色体数目的测定
        1.8.3 亚型鉴定
        1.8.4 间接免疫荧光鉴定(IFA)
        1.8.5 MAb抗病毒蛋白的鉴定
        1.8.6 交叉反应性分析
2 结果与分析
    2.1 间接ELISA检测方法的建立
    2.2 亚类鉴定
    2.3 腹水抗体的纯化
    2.4 效价测定
    2.5 染色体计数
    2.6 间接免疫荧光试验
    2.7 MAb的病毒蛋白识别分析
    2.8 特异性试验
    2.9 MAb的中和活性鉴定
3 讨论



本文编号：3844593