猪伪狂犬病毒感染PK15细胞的蛋白质组学研究

发布时间：2023-09-03 17:38

　　伪狂犬病毒(Pseudorabies Virus,PRV)能引起多种动物的发热、奇痒及脑脊髓炎。猪是PRV的贮存宿主和传染源,PRV感染猪引起伪狂犬病,导致新生仔猪出现致死性脑炎,肥育猪呼吸障碍,母猪繁殖障碍等症状。PRV属于疱疹病毒科,在全世界广泛分布。2012年,在中国北部和东部地区,猪伪狂犬病史无前例的大规模爆发,对养猪业造成巨大的经济损失。目前PRV的致病机制还不是很清楚。为进一步研究PRV感染引起的宿主细胞的基因表达变化,寻找治疗猪伪狂犬病的可能靶标,本研究利用同位素标记相对和绝对定量(Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantification,iTRAQ)技术分析了PRV感染猪肾上皮细胞(Porcine Epithelial Cells,PK15)后的全基因组蛋白表达变化,并对差异表达蛋白基因进行生物信息学分析,发现PRV感染后能够引起内质网应激反应。本实验为进一步研究PRV与宿主细胞互作提供了分子基础。1.PRV感染PK15细胞的蛋白质组学研究一步生长曲线显示,在PRV ZJ(浙江)株感染PK15细胞后24h时,病毒滴度最...

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摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 猪伪狂犬病毒
        1.1.1 PRV的基因组结构
        1.1.2 PRV感染机制
    1.2 蛋白质组学的研究技术
        1.2.1 蛋白质组学在病毒学研究中的应用
        1.2.2 同位素标记相对与绝对定量(iTRAQ)技术
        1.2.3 iTRAQ技术的实验原理
        1.2.4 iTRAQ的优势
    1.3 PERK信号通路的调控机制
        1.3.1 热休克蛋白HSP70家族
        1.3.2 蛋白激酶R样内质网激酶
        1.3.3 真核细胞起始因子
        1.3.4 激活转录因子
    1.4 细胞外调节蛋白激酶
第二章 PRV感染PK15细胞的蛋白质组学研究
    2.1 研究目的与意义
    2.2 实验材料
        2.2.1 细胞、毒株
        2.2.2 主要试剂
        2.2.3 Westernblot抗体试剂
        2.2.4 Westernblot主要缓冲液及试剂配置
        2.2.5 主要实验仪器及材料
    2.3 实验方法
        2.3.1 细胞的复苏
        2.3.2 猪伪狂犬病毒扩大培养
        2.3.3 病毒滴度的测定
        2.3.4 用于蛋白质组学分析的细胞样品制备
        2.3.5 蛋白质的Bradford定量
        2.3.6 细胞蛋白分离与消化并用iTRAQ标记
        2.3.7 LC-MSMS分析
        2.3.8 生物信息学分析
        2.3.9 免疫荧光实验
        2.3.10 Westernblot实验
    2.4 结果与分析
        2.4.1 Bradford定量和SDS质检结果
        2.4.2 PRV感染PK15细胞动力学分析
        2.4.3 蛋白质的鉴定结果
        2.4.4 差异蛋白的验证
    2.5 讨论
        2.5.1 参与代谢过程的差异表达蛋白
        2.5.2 参与内质网蛋白质加工的差异表达蛋白
        2.5.3 参与翻译的差异表达蛋白
        2.5.4 参与mRNA前体剪接的差异表达蛋白
        2.5.5 参与ECM-受体相互作用和细胞骨架的差异表达蛋白
        2.5.6 其它差异表达的蛋白
第三章 PRV感染激活内质网应激信号通路的分子机制
    3.1 研究的目的与意义
    3.2 实验材料
        3.2.1 主要试剂(同2.2.2)
        3.2.2 主要实验仪器及设备(同2.2.5)
    3.3 实验方法
        3.3.1 细胞的复苏(同2.3.1)
        3.3.2 PRV感染PK15细胞
        3.3.3 细胞总蛋白的提取
        3.3.4 BCA蛋白浓度测定
    3.4 结果与分析
        3.4.1 蛋白质的BCA测定结果
        3.4.2 Westernblot分析结果
        3.4.3 讨论
实验结果
下一步研究计划
参考文献
个人简介
硕士期间发表论文
致谢



本文编号：3845483