非洲猪瘟病毒pK205R蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

发布时间：2023-09-28 23:17

　　非洲猪瘟(ASF)传播对我国生猪养殖造成重大危害,开发用于ASF诊断产品已刻不容缓。本研究为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)pK205R蛋白单克隆抗体,构建了能表达ASFV pK205R蛋白的工程菌BL21/pET-pK205R。经IPTG诱导,可表达可溶性的pK205R蛋白。经SDS-PAGE检测,获得的蛋白大小为25 kDa左右。经Western blot鉴定,纯化后的蛋白可与ASFV阳性血清发生特异性反应。以纯化的ASFV pK205R蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,制备了12株针对ASFV pK205R蛋白的单克隆抗体。经间接ELISA方法鉴定,单克隆抗体的效价均不低于1∶80 000。单克隆抗体重链亚类分别为IgG1及IgG2b,轻链亚类均为κ。通过间接免疫荧光试验(IFA)测定12株单克隆抗体均不与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪流行性腹泻病毒存在交叉反应,且均能与ASFV反应。本研究为建立快速检测非洲猪瘟病毒感染的诊断方法奠定了基础。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验动物
    1.2 主要试剂
    1.3 表达菌株的构建
    1.4 pK205R蛋白表达、纯化及鉴定
    1.5 pK205R蛋白单克隆抗体制备
        1.5.1 动物免疫
        1.5.2 间接ELISA方法的建立
        1.5.3 细胞融合及筛选
        1.5.4 腹水的制备
    1.6 单克隆抗体的鉴定
        1.6.1 单克隆抗体效价及亚类的测定
        1.6.2 单克隆抗体特异性鉴定
        1.6.3 单克隆抗体与ASFV反应性检测
2 结果
    2.1 重组质粒的构建与鉴定
    2.2 pK205R蛋白表达纯化与鉴定
    2.3 单克隆抗体效价检测
    2.4 单克隆抗体亚类鉴定
    2.5 特异性检测
    2.6 单克隆抗体与ASFV反应性检测
3 讨论



本文编号：3848811