布氏杆菌S2弱毒疫苗株的S2JY3基因生物信息学分析及原核表达

发布时间：2023-09-28 23:52

　　为分析布氏杆菌S2弱毒疫苗特有的S2JY3基因的功能和作为诊断抗原的可能性,应用PCR技术扩增S2JY3基因,用限制性内切酶对目的片段与pET30a(+)原核表达载体进行双酶切,构建重组表达载体,用IPTG诱导表达,蛋白纯化,并进行Western blot检测;利用生物信息学软件对该基因理化性质、结构特点进行分析。结果表明, S2JY3基因全长1 257 bp,编码418个氨基酸,蛋白质理论大小值为43 kDa,理论等电点为9.73,蛋白质不稳定系数为36.31,是稳定蛋白,总平均亲水性为-0.577,为亲水性蛋白;跨膜结构和信号肽分析表明S2JY3蛋白无跨膜区,无信号肽区域。本研究成功构建了重组表达蛋白rS2JY3,Western blot结果表明rS2JY3与布氏杆菌S2疫苗免疫羊血清发生特异性结合反应,不与自然感染羊血清反应,具有良好的抗原性和特异性。该研究为羊布氏杆菌S2疫苗免疫和自然感染快速检测和鉴定等提供理论依据。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株与载体
        1.1.2 主要试剂
    1.2 方法
        1.2.1 目的基因的扩增
        1.2.2 pET30a-S2JY3的构建
        1.2.3 重组表达菌诱导表达及Western blot检测
        1.2.4 S2JY3基因生物信息学分析
2 结果与分析
    2.1 目的基因的PCR扩增
    2.2 pET30a(+)-S2JY3重组质粒的鉴定
    2.3 重组表达菌Western blot检测
    2.4 S2JY3基因编码产物的生物信息学分析
        2.4.1 S2JY3蛋白理化性质分析
        2.4.2 S2JY3蛋白亲疏水性分析
        2.4.3 S2JY3蛋白跨膜区和信号肽预测
        2.4.4 S2JY3蛋白二级结构预测
        2.4.5 蛋白三级结构预测
        2.4.6 蛋白抗原表位预测
3 讨论



本文编号：3848863