MiR-125a在脂肪细胞分化中的作用研究
发布时间：2023-10-12 01:30
脂肪细胞分化是一个高度精细的调控过程,多种转录因子、信号通路及miRNA均在脂肪细胞的分化过程发挥重要的作用。在众多调控脂肪细胞分化的转录因子中，PPARγ和C/EBPα发挥核心作用，被称为脂肪细胞分化的主效基因（master genes）。它们能够激活下游在脂质积累及脂代谢发挥重要作用的酶及功能蛋白的表达，如脂肪酸结合蛋白4（FABP4），脂肪酸合酶（FAS），脂蛋白脂酶（LPL）。 近年来，关于miRNAs在脂肪细胞分化中的报道逐渐增多。实验室李国喜等(Li etal.2011)对不同发育阶段猪脂肪组织miRNAs的solexa测序结果显示miR-125a在猪脂肪组织中高丰度表达，并且在240日龄大白猪背膘中的表达比7日龄小猪高3倍多，因此我们推测miR-125a在脂肪组织发育中发挥重要作用。 本实验以猪前体脂肪细胞以及3T3L1前体脂肪细胞系作为实验材料，采用生物信息学方法对miR-125a进行靶基因分析，综合TargetScan和PicTar等的预测结果显示miR-125a可靶作用于ERRα，并用荧光素酶报告系统验证miR-125a的靶基因ERRα。随后使用Real time ...
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 脂肪细胞的起源与分布
1.2 脂肪细胞的类型
1.3 脂肪细胞分化模型
1.4 脂肪细胞的分化过程
1.5 表观遗传学与脂肪细胞分化
1.5.1 组蛋白修饰
1.5.2 miRNA 与脂肪细胞分化
1.6 miRNA 起源与调节
1.7 miR‐125a 的研究进展
1.8 雌激素受体相关受体α
第二章 MIR‐125a 在猪原代脂肪细胞分化过程中的作用研究
2.1 前言
2.2 材料与方法
2.2.1 材料
2.2.2 猪前体脂肪细胞的分离获得与培养
2.2.3 猪前体脂肪细胞的诱导分化及油红 O 染色
2.2.4 TRIzol 法提取总 RNA
2.2.5 反转录及 Real time‐qPCR
2.2.6 细胞中总蛋白的提取
2.2.7 Western Blot 分析
2.2.8 猪 ERRα 3′UTR 的克隆
2.2.9 psiCHECK‐ERRα‐UTR 载体的构建
2.2.10 psiCHECK‐ERRα‐UTR‐muta 突变载体构建(Ho et al. 1989)
2.2.11 双荧光素酶报告基因检测分析
2.3 数据统计分析
2.4 结果
2.4.1 MiR‐125a 靶基因预测及荧光素酶报告基因验证
2.4.2 MiR‐125a 组织表达谱
2.4.3 猪前体脂肪细胞分化模型的建立及 miR‐125a 脂肪细胞分化时序表达
2.4.4 使用 agomir 过表达 miR‐125a 抑制猪前体脂肪细胞分化
2.4.5 使用 antagomir 抑制 miR‐125a 促进猪前体脂肪细胞分化
2.4.6 在猪前体脂肪细胞分化过程中 miR‐125a 靶向 ERRα
2.5 讨论
第三章 MIR‐125a‐5p 在 3T3‐L1 前体脂肪细胞分化中发挥负调控作用
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 材料
3.2.2 组织中ＲNA 的提取
3.2.3 3T3‐L1 细胞培养及诱导分化
3.2.4 细胞转染
3.2.5 RNA 提取及 Real‐time qPCR
3.2.6 Western blot 分析
3.2.7 油红 O 染色及定量
3.3 数据统计分析
3.4 研究结果
3.4.1 MiR‐125a‐5p 在小鼠各组织中的表达谱
3.4.2 MiR‐125a‐5p 在 3T3‐L1 分化过程中的时序表达
3.4.3 过表达 miR‐125a‐5p 抑制 3T3‐L1 前体脂肪细胞分化
3.4.4 抑制 miR‐125a‐5p 促进 3T3‐L1 前体脂肪细胞分化
3.5 讨论
结论
一、MIR‐125A通过靶向 ERRΑ抑制猪前体脂肪细胞分化
二、MIR‐125A‐5P在 3T3‐L1 前体脂肪细胞分化中发挥负调控作用
创新点
进一步研究内容
参考文献
附录
致谢
个人简介
本文编号：3853183
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 脂肪细胞的起源与分布
1.2 脂肪细胞的类型
1.3 脂肪细胞分化模型
1.4 脂肪细胞的分化过程
1.5 表观遗传学与脂肪细胞分化
1.5.1 组蛋白修饰
1.5.2 miRNA 与脂肪细胞分化
1.6 miRNA 起源与调节
1.7 miR‐125a 的研究进展
1.8 雌激素受体相关受体α
第二章 MIR‐125a 在猪原代脂肪细胞分化过程中的作用研究
2.1 前言
2.2 材料与方法
2.2.1 材料
2.2.2 猪前体脂肪细胞的分离获得与培养
2.2.3 猪前体脂肪细胞的诱导分化及油红 O 染色
2.2.4 TRIzol 法提取总 RNA
2.2.5 反转录及 Real time‐qPCR
2.2.6 细胞中总蛋白的提取
2.2.7 Western Blot 分析
2.2.8 猪 ERRα 3′UTR 的克隆
2.2.9 psiCHECK‐ERRα‐UTR 载体的构建
2.2.10 psiCHECK‐ERRα‐UTR‐muta 突变载体构建(Ho et al. 1989)
2.2.11 双荧光素酶报告基因检测分析
2.3 数据统计分析
2.4 结果
2.4.1 MiR‐125a 靶基因预测及荧光素酶报告基因验证
2.4.2 MiR‐125a 组织表达谱
2.4.3 猪前体脂肪细胞分化模型的建立及 miR‐125a 脂肪细胞分化时序表达
2.4.4 使用 agomir 过表达 miR‐125a 抑制猪前体脂肪细胞分化
2.4.5 使用 antagomir 抑制 miR‐125a 促进猪前体脂肪细胞分化
2.4.6 在猪前体脂肪细胞分化过程中 miR‐125a 靶向 ERRα
2.5 讨论
第三章 MIR‐125a‐5p 在 3T3‐L1 前体脂肪细胞分化中发挥负调控作用
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 材料
3.2.2 组织中ＲNA 的提取
3.2.3 3T3‐L1 细胞培养及诱导分化
3.2.4 细胞转染
3.2.5 RNA 提取及 Real‐time qPCR
3.2.6 Western blot 分析
3.2.7 油红 O 染色及定量
3.3 数据统计分析
3.4 研究结果
3.4.1 MiR‐125a‐5p 在小鼠各组织中的表达谱
3.4.2 MiR‐125a‐5p 在 3T3‐L1 分化过程中的时序表达
3.4.3 过表达 miR‐125a‐5p 抑制 3T3‐L1 前体脂肪细胞分化
3.4.4 抑制 miR‐125a‐5p 促进 3T3‐L1 前体脂肪细胞分化
3.5 讨论
结论
一、MIR‐125A通过靶向 ERRΑ抑制猪前体脂肪细胞分化
二、MIR‐125A‐5P在 3T3‐L1 前体脂肪细胞分化中发挥负调控作用
创新点
进一步研究内容
参考文献
附录
致谢
个人简介
本文编号：3853183
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