副猪嗜血杆菌的分离鉴定及菌体灭活苗的研制

发布时间：2023-10-12 01:39

　　为了查明导致北疆地区部分规模化猪场疑似副猪嗜血杆菌病的病原及其生物学特性。方法:采集来源于不同地区规模化猪场病死猪的病料,包括肺脏、淋巴结和关节积液等;选择TSA培养基培养,采用10%CO₂兼性厌氧条件对细菌分离,根据该菌的16S rRNA来设计引物,采用PCR方法对分离株进行鉴定,然后观察其培养、生理生化、血清学和药敏特性,最后观察分离株对小鼠的致病性。为提高候选株的培养效率,掌握候选株的生长特性,为疫苗菌株的制备提供理论依据。本试验选择基于OD值连续测定的活菌计数法,将候选株接种于TSB培养基上,置于10%CO₂培养,对该菌株的OD₆₀₀值进行测定。鉴于副猪嗜血杆菌血清型众多,商品化疫苗尚未全部覆盖。本试验以不同血清型的菌株作为候选菌株,进行扩大培养,制备菌体灭活苗,同时对该疫苗的物理性状、安全性和免疫保护力进行评价。结果:总共从174份病料中分离到31株分离株,其生理生化、培养及分子特征均符合副猪嗜血杆菌的特性;且分离株的血清型包括1、4、5、12四种;分离株副猪嗜血杆菌对庆大霉素、磺胺异噁唑、土霉素、头孢噻肟、林...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词(Abbrevintion)
文献综述
    1 病原学介绍
    2 流行病学
    3 毒力
        3.1 荚膜
        3.2 脂多糖(LPS)
        3.3 外膜蛋白(OMP)
        3.4 菌毛
        3.5 转铁蛋白
        3.6 酶类
    4 致病机理及病理变化
    5 诊断方法
        5.1 分离鉴定
        5.2 血清学鉴定
        5.3 PCR技术
        5.4 生物学方法
    6 防制
        6.1 饲养管理
        6.2 疫苗接种
        6.3 药物治疗
试验一 副猪嗜血杆菌的分离鉴定及相关特性研究
    1 材料和方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 病料
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 培养基的配制
            1.1.4 实验仪器
            1.1.5 实验动物
            1.1.6 PCR引物设计
            1.1.7 微量生化发酵管
            1.1.8 药敏纸片
            1.1.9 卫星现象检查用菌种
        1.2 实验方法
            1.2.1 细菌的分离与纯化
            1.2.2 染色镜检
            1.2.3 PCR鉴定
            1.2.4 生化鉴定
            1.2.5 药物敏感性试验
            1.2.6 血清型分型
            1.2.7 分离株小鼠致病性试验
    2 结果
        2.1 细菌分离
        2.2 镜检
        2.3 种特异性PCR鉴定
        2.4 同源性比对结果
        2.5 生化鉴定
        2.6 药敏试验
        2.7 血清分型结果
        2.8 致病性试验
    3 小结
    4 讨论
试验二 副猪嗜血杆菌分离株HZG-6 生长曲线的测定
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 菌株
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 主要培养基及其制备
        1.2 方法
            1.2.1 HZG-6 株菌液的制备
            1.2.2 生长曲线的测定
    2 结果与分析
    3 讨论
    4 小结
试验三 三价菌体灭活苗的制备及免疫保护力测定
    1 材料和方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 试验菌株和试验动物
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 培养基
        1.2 方法
            1.2.1 半数致死量(LD50)的测定
            1.2.2 抗原制备
            1.2.3 物理性状检验
            1.2.4 疫苗安全性检测
            1.2.5 免疫保护试验
            1.2.6 血清抗体的检测
    2 结果
        2.1 半数致死量(LD50)的测定
        2.2 疫苗制备
        2.3 黏度测定
        2.4 疫苗稳定性检验
        2.5 安全性检测
        2.6 免疫保护试验
        2.7 抗体水平检测
    3 小结
    4 讨论
结论
参考文献
致谢
作者简历
导师评阅表



本文编号：3853197