小鼠乳腺上皮细胞瘤与间质细胞瘤成瘤特性及免疫特性分析

发布时间：2023-10-27 08:14

　　背景:肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)是肿瘤细胞逃避免疫监视和产生耐药性的重要场所,同时也是循环肿瘤细胞定殖和产生转移灶的关键。肿瘤内异质性(intra-tumor heterogeneity,ITH)描述了肿瘤细胞所显示的不同形态学、基因和表型特征,这种性质既表现在不同类型的肿瘤细胞之间,也表现在同种肿瘤细胞内。研究表明ITH是导致肿瘤转移和耐药性的重要因素。然而,目前关于肿瘤块的解剖学边缘和内部之间的ITH和免疫微环境研究相对不足。目的:本研究使用高转移性的4T1肿瘤小鼠模型,通过原代细胞培养肿瘤块的解剖学边缘和内部的细胞获得肿瘤细胞株,初步探究不同解剖学位置肿瘤细胞的肿瘤内异质性和免疫微环境,为乳腺癌肿瘤转移及耐药性研究提供相关参考和支持。方法:(1)利用小鼠4T1乳腺癌模型,HE染色镜检观察等方法,探究小鼠乳腺癌肿瘤内部结构。PCR法检测间质细胞瘤和上皮细胞瘤炎性因子及其受体的表达差异;流式细胞术检测间质细胞瘤和上皮细胞瘤中淋巴细胞和髓性来源免疫细胞比例差异。(2)构建上皮细胞瘤、间质细胞瘤尾静脉注射/原位移植模型。利用石蜡包埋切片染色等技术探...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 乳腺癌肿瘤内异质性
        1.1.1 肿瘤内异质性组织病理学特征
        1.1.2 肿瘤微环境与肿瘤内异质性
    1.2 乳腺癌肿瘤微环境中免疫细胞构成
        1.2.1 肿瘤浸润髓性细胞
        1.2.2 肿瘤浸润淋巴细胞
        1.2.3 肿瘤浸润树突细胞
    1.3 肿瘤转移微环境
        1.3.1 肿瘤细胞转移机制
        1.3.2 转移性肿瘤微环境
        1.3.3 肿瘤微环境中的低氧环境
    1.4 本试验目的及意义
第二章 上皮细胞瘤和间质细胞瘤基因表达差异及其微环境免疫细胞组成
    2.1 试验材料与试剂
        2.1.1 试验细胞株
        2.1.2 试验动物
        2.1.3 试剂及仪器
        2.1.4 工作液配制
    2.2 试验方法
        2.2.1 细胞传代培养
        2.2.2 建立小鼠4T1 乳腺癌模型
        2.2.3 HE染色
        2.2.4 RNA提取与cDNA合成
        2.2.5 RT-PCR步骤和程序
        2.2.6 基因表达量算法
        2.2.7 单细胞悬液制备及抗体标记
        2.2.8 流式细胞术上机检测
        2.2.9 数据处理
    2.3 结果与分析
        2.3.1 4T1 小鼠乳腺癌肿瘤模型建立与肿瘤内部细胞分层
        2.3.2 上皮细胞瘤、间质细胞瘤和4T1 细胞中Toll样受体、整合素、趋化因子受体等基因表达的差异
        2.3.3 上皮细胞瘤和间质细胞瘤微环境中淋巴细胞和髓性细胞的比例分析
第三章 上皮细胞瘤和间质细胞瘤细胞的筛选及致瘤动物模型的建立
    3.1 试验材料与试剂
        3.1.1 试验动物
        3.1.2 试剂及仪器
        3.1.3 工作液配制
    3.2 试验方法
        3.2.1 上皮细胞瘤和间质细胞瘤细胞筛选
        3.2.2 吉姆萨染色
        3.2.3 建立小鼠上皮细胞瘤和间质细胞瘤肿瘤模型
        3.2.4 建立小鼠4T1 乳腺癌肿瘤模型(阳性对照组)
        3.2.5 肿瘤生长曲线及小鼠解剖
    3.3 结果与分析
        3.3.1 上皮细胞瘤和间质细胞瘤细胞筛选
        3.3.2 上皮细胞瘤和间质细胞瘤移植小鼠模型致瘤性与生存曲线差异
        3.3.3 上皮细胞瘤和间质细胞瘤小鼠移植模型器官重量及转移情况
第四章 上皮细胞瘤和间质细胞瘤移植模型脏器转移情况及免疫细胞比例变化趋势
    4.1 试验材料与试剂
        4.1.1 试验试剂
        4.1.2 工作液配制
    4.2 试验方法
        4.2.1 小鼠解剖与组织固定
        4.2.2 石蜡包埋与石蜡切片制作
        4.2.3 HE染色
        4.2.4 单细胞悬液制备及抗体标记
        4.2.5 流式细胞术上机检测
        4.2.6 数据处理
    4.3 结果与分析
        4.3.1 上皮细胞瘤和间质细胞瘤尾静脉注射/原位移植模型器官转移灶情况
        4.3.2 上皮细胞瘤和间质细胞瘤小鼠尾静脉移植模型中免疫细胞比例变化趋势
第五章 讨论与结论
    5.1 讨论
    5.2 结论
参考文献
附录
致谢
攻读硕士学位期间发表文章



本文编号：3856936