通过两种不同载体表达的猪细小病毒VP2生物学特性的比较研究

发布时间：2023-11-20 18:51

　　猪细小病毒（Porcine parvovirus, PPV）是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一。PPV感染呈世界性分布，在许多地方已经成为地方性疾病，给养猪业造成严重的经济损失。PPV属于细小病毒科细小病毒属，为单股负链DNA病毒，无囊膜，衣壳蛋白包括VP1、VP2和VP3，其中VP2为主要的结构蛋白。VP2决定着PPV的组织嗜性、毒力和血凝活性，并且能够诱导机体产生中和抗体。VP2在杆状病毒表达载体系统（BEVS）中能够自我组装成病毒样颗粒（VLPs），是亚单位疫苗研究的首选蛋白。为评价VP2作为亚单位疫苗的潜力，本研究分别利用BEVS和pET表达系统表达VP2，比较其反应原性和免疫原性的差异。 应用电子显微镜观察两种VP2的形态，发现BEVS表达的VP2能够自我组装成VLPs，而pET表达系统表达的VP2不能组装成VLPs。western blot试验发现这两种VP2均能够与PPV阳性血清发生特异性反应。血凝试验（HA）发现BEVS表达的VP2具有血凝活性，血凝效价为210，而pET表达系统表达的VP2无血凝活性。将两种VP2作为免疫试剂分别免疫豚鼠，将豚鼠随机分Ⅰ组（灭活疫苗1....

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
目录
第一章 文献综述
    1.1 PPV 研究进展
        1.1.1 PPV 简介
        1.1.2 PPV 感染的临床症状
        1.1.3 PPV 的分子生物学特性
        1.1.4 PPV 的培养特性
        1.1.5 PPV 感染机制
        1.1.6 PPV 感染的组织病变
        1.1.7 PPV 的流行病学
    1.2 VP2 基因及其编码的蛋白研究进展
    1.3 PPV 疫苗研究进展
        1.3.1 弱毒疫苗
        1.3.2 灭活疫苗
        1.3.3 基因疫苗
    1.4 研究的目的及意义
第二章 VP2 在杆状病毒表达载体系统中的表达
    2.1 试验材料与器材
        2.1.1 试验材料
        2.1.2 主要试验器材
    2.2 试验方法
        2.2.1 重组杆状病毒在 Sf9 细胞中的培养
        2.2.2 VP2 电镜观察
        2.2.3 VP2 Western blot 试验
        2.2.4 VP2 血凝试验
        2.2.5 VP2 纯化
    2.3 结果
        2.3.1 VP2 电镜观察结果
        2.3.2 VP2 Western blot 试验结果
        2.3.3 VP2 血凝试验结果
        2.3.4 VP2 纯化结果
    2.4 讨论
第三章 VP2 在 pET 表达系统中的表达
    3.1 试验材料与器材
        3.1.1 试验材料
        3.1.2 主要试验器材
    3.2 试验方法
        3.2.1 引物设计
        3.2.2 PPV 基因组 DNA 的提取
        3.2.3 VP2 基因全长序列的扩增
        3.2.4 PCR 产物的纯化
        3.2.5 重组质粒的构建
        3.2.6 重组质粒的提取
        3.2.7 重组质粒的鉴定
        3.2.8 重组质粒的表达
        3.2.9 VP2 电镜观察
        3.2.10 VP2 Western blot 试验
        3.2.11 VP2 血凝试验
        3.2.12 VP2 纯化
    3.3 结果
        3.3.1 VP2 基因全长序列的扩增结果
        3.3.2 重组质粒的鉴定结果
        3.3.3 重组质粒的表达结果
        3.3.4 VP2 电镜观察结果
        3.3.5 VP2 Western blot 试验结果
        3.3.6 VP2 血凝试验结果
        3.3.7 VP2 纯化结果
    3.4 讨论
第四章 纳米 PCR 检测方法的建立
    4.1 试验材料
    4.2 试验方法
        4.2.1 引物设计
        4.2.2 VP2 重组质粒模板的制备
        4.2.3 纳米 PCR 检测方法的建立以及条件优化
        4.2.4 敏感性试验
        4.2.5 特异性试验
        4.2.6 纳米 PCR 与普通 PCR 对临床样品的检测比较
    4.3 结果
        4.3.1 阳性模板的制备
        4.3.2 纳米 PCR 检测方法的建立以及条件优化
        4.3.3 敏感性试验
        4.3.4 特异性试验
        4.3.5 临床样品的检测
    4.4 讨论
第五章 VP2 亚单位疫苗免疫豚鼠试验
    5.1 试验材料
    5.2 试验方法
        5.2.1 豚鼠试验免疫方案
        5.2.2 血凝抑制试验
        5.2.3 病毒 TCID50的测定
        5.2.4 攻毒以及保护效力的评价
        5.2.5 淋巴细胞增殖试验
        5.2.6 纳米 PCR 检测
    5.3 结果
        5.3.1 血凝抑制试验结果
        5.3.2 淋巴细胞增殖试验结果
        5.3.3 纳米 PCR 检测结果
    5.4 讨论
        5.4.1 血凝抑制试验
        5.4.2 淋巴细胞增殖试验
        5.4.3 纳米 PCR 检测
第六章 结论
参考文献
附录
致谢
作者简历



本文编号：3865633