奶牛乳房炎致病菌分离鉴定及快速诊断试剂盒的研发与应用

发布时间：2023-11-20 19:32

　　本研究对广西的5个奶牛场的75份乳房炎奶样进行细菌分离鉴定,并根据鉴定结果对无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和蜡样芽孢杆菌4种主要的致病菌建立多重PCR快速诊断技术。并对该技术进行体系优化和检测评价,在此基础上开发研制出可用于临床实际中牛奶及乳制品的目标病原菌的快速检测试剂盒。实验内容和结果如下： 1.通过对广西的5个大型奶牛场75份乳样进行细菌分离鉴定,实验结果表明,75份乳样中共检出共135株病原菌微生物,其中金黄色葡萄球菌有24株,占17.87%；表皮葡萄球菌8株,占5.93%；腐生葡萄球菌5株,占3.70%；无乳链球菌17株,占12.59%；乳房链球菌9株,占6.67%;乳链球菌7株,占5.19%；停乳链球菌5株,占3.70%；粪链球菌5株,占3.70%；白色念珠菌12株,8.89%；酵母菌6株,占4.44%；大肠杆菌17株,占12.59%;沙门杆菌6株,占4.44%；福氏志贺杆菌2株,占1.48%；化脓棒状杆菌2株,占1.48%;蜡样芽孢杆菌10株,占7.42%。鉴定结果表明引起广西地区奶牛乳房炎的主要致病菌是无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌以及白色念珠...

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 奶牛乳房炎研究概述
    1.1 奶牛乳房炎的流行病学调查
    1.2 乳房炎的类型
        1.2.1 根据临床表现症状分
    1.3 奶牛乳房炎的发病因素
        1.3.1 根据病原菌分
        1.3.2 环境卫生
        1.3.3 营养因素
    1.4 奶牛乳房炎诊断和检测方法研究进展
        1.4.1 奶牛乳房炎的诊断
        1.4.2 分子生物学检测方法
    1.5 多重PCR检测方法的研究及应用现状
    1.6 PCR试剂盒研究现状
    1.7 本课题的研究内容与意义
第二章 广西地区奶牛乳房炎致病菌的分离鉴定
    2.1 材料与方法
        2.1.1 乳样来源
        2.1.2 仪器设备
        2.1.3 培养基和试剂
    2.2 乳样采集
    2.3 致病菌的分离鉴定及纯化
        2.3.1 致病菌的鉴定
        2.3.2 生化鉴定
    2.4 结果与分析
        2.4.1 流行病学调查结果
        2.4.2 讨论
第三章 奶牛乳房炎4重PCR检测方法的建立及优化
    3.1 材料与方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 结果与分析
        3.2.1 单重PCR体系的建立与结果分析
        3.2.2 单重PCR特异性结果
        3.2.3 单重PCR敏感性结果分析
        3.2.4 多重PCR体系的优化结果
        3.2.5 多重PCR特异性结果
        3.2.6 4重PCR检测临床奶样结果
    3.3 讨论
        3.3.1 模板的制备
        3.3.2 引物的设计
        3.3.3 体系的优化
        3.3.4 敏感性的结果分析
        3.3.5 多重PCR假阳性分析
        3.3.6 假阳性试验控制
        3.3.7 PCR反应添加剂的分析
第四章 四重PCR快速检测试剂盒的组装、保存期试验及使用方法
    4.1 材料与方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 试剂
        4.1.3 仪器
        4.1.4 实验方法
        4.1.5 试剂盒的使用方法
    4.2 结果与讨论
        4.2.1 不同保存条件对试剂盒的影响
        4.2.2 检测试剂盒保存期试验结果
        4.2.3 试剂盒临床检测结果
        4.2.4 讨论
第五章 小结、创新点与展望
    5.1 研究小结
    5.2 创新点
    5.3 展望
参考文献
附录1 扩增序列
附录2 英文缩写词表
附录3 部分细菌分离图
致谢
硕士期间发表论文及专利



本文编号：3865698