鸭源H7和H4亚型禽流感病毒HA蛋白表达纯化及其免疫保护效力分析

发布时间：2024-01-05 18:09

　　流感病毒是一种重要的人兽共患病病原,对人类和动物健康构成重大威胁。禽类是流感病毒的自然宿主,目前从禽类宿主中分离的流感病毒根据表面蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)抗原性的不同,分为16种不同的HA亚型和9种不同的NA亚型。其中,H4亚型AIV在世界范围内广泛存在。已有研究发现H4亚型AIV可以直接感染哺乳动物并且具备一定的在哺乳动物间水平传播的能力,对人类健康构成潜在威胁。H7N9流感病毒自2013年首次报道感染人以来,已严重危害公共卫生安全。而且,随着流行病学监测和遗传进化研究的深入,发现H7N9病毒进化复杂,出现了与2013年感染人病毒不同进化谱系的新的鸭源H7N9病毒,对人类健康构成新的潜在威胁。疫苗免疫是防控流感流行和暴发的最有效手段。为了应对H4以及新出现的鸭源H7N9亚型AIV对人类健康的潜在威胁,我们进行了H4和鸭源H7N9病毒HA蛋白表达纯化及其免疫保护效力研究。以A/Duck/Jiangxi/S21055/2012(H4N2)及A/Duck/Fujian/S4170/2014(H7N9)AIV HA基因为模板,将其分别克隆到昆虫细胞表达载体pFastBac1中,...

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 引言
    1.1 禽流感病毒简介
        1.1.1 禽流感病毒的分子生物学特性
        1.1.2 禽流感病毒的宿主范围
        1.1.3 禽流感病毒引起的临床症状
        1.1.4 禽流感病毒的传播与进化
        1.1.5 H4亚型及H7亚型禽流感病毒
    1.2 禽流感疫苗概述
        1.2.1 全病毒灭活疫苗
        1.2.2 重组病毒灭活疫苗
        1.2.3 流感病毒减毒活疫苗
        1.2.4 重组活载体疫苗
        1.2.5 DNA疫苗
        1.2.6 复制缺陷型病毒疫苗
        1.2.7 亚单位疫苗
    1.3 本研究的目的和意义
第二章 H4及H7亚型禽流感病毒HA蛋白表达与纯化
    2.1 材料与方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 实验方法
        2.1.3 p FBac HA质粒转化DH10Bac感受态细胞以及Bacmid的提取
        2.1.4 H4及H7亚型流感病毒HA蛋白表达与检测
    2.2 试验结果
        2.2.1 H4及H7亚型流感病毒HA基因的PCR扩增
        2.2.2 重组Bacmid-HA的PCR鉴定
        2.2.3 H4及H7亚型流感病毒重组蛋白表达的间接免疫荧光鉴定
        2.2.4 Western blot鉴定H4及H7亚型流感病毒HA蛋白的表达
        2.2.5 H4及H7亚型流感病毒HA蛋白亲和层析纯化
        2.2.6 H4及H7亚型流感病毒HA蛋白的凝胶过滤纯化
    2.3 讨论
第三章 H4及H7亚型禽流感病毒HA蛋白的免疫原性研究
    3.1 材料与方法
        3.1.1 试验材料
        3.1.2 试验方法
    3.2 试验结果
        3.2.1 不同收获时间H4及H7亚型流感病毒HA蛋白的血凝活性鉴定
        3.2.2 病毒株鸡胚半数感染量(EID₅₀)的测定结果
        3.2.3 HI抗体测定
        3.2.4 攻毒保护结果
    3.3 讨论
第四章 全文结论
参考文献
附录
    附录 1
    附录 2
致谢
作者简历



本文编号：3877084