甲型流感病毒核蛋白保守性B细胞表位的鉴定研究

发布时间：2024-01-24 14:35

　　甲型流感病毒(Influenza A viruses)属于正粘病毒科,其基因组是由8个分节段的单股负义RNA链组成的。历史上暴发过多次甲型流感病毒引起的全球流感大流行,造成大规模人群感染死亡：每年呈季节性流行的H1N1和H3N2甲型流感病毒可造成全球25-50万人感染死亡；近年来不断涌现的各种人感染禽流感病毒死亡事件也均是由甲型流感病毒引发的,因此,系统研究甲型流感病毒有助于加强人类对该病毒防控能力。甲型流感病毒核蛋白(Nucleoprotein, NP)高度保守,是流感病毒诊断与分型的重要靶标；近年来研究发现NP在病毒的复制和增殖过程中起重要作用,使NP逐渐成为一个重要的抗流感病毒治疗靶标,因此,研究甲型流感NP蛋白对该病毒的诊断和抗病毒治疗均具有重要意义。表位研究对于病毒的诊断和抗病毒治疗均具有重要指导意义,但迄今NP中的B细胞表位仍罕见报道,可能与NP作为一个多聚体蛋白而构象复杂有关。本课题组前期在开发甲型流感病毒诊断试剂中曾积累了一批NP特异性单抗,本研究拟在此基础上,进一步对这些NP单抗进行表位鉴定,发现潜在的保守性B细胞表位,并研究表位的相关功能,以期对流感病毒的预防和治疗...

【文章页数】：99 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 流感病毒概述
        1.1.1 流感病毒的分类及命名
        1.1.2 流感病毒的形态结构及组成
        1.1.3 甲型流感病毒基因组编码蛋白的结构与功能
        1.1.4 甲型流感病毒的生活史
    1.2 甲型流感病毒的流行病学
        1.2.1 流感病毒的流行状况
        1.2.2 病毒的变异及进化
    1.3 流感病毒的预防、治疗及诊断手段
        1.3.1 流感病毒的预防及治疗性药物
        1.3.2 流感病毒的传统诊断法
        1.3.3 流感病毒的分子诊断法
        1.3.4 流感病毒的快速诊断法
    1.4 流感病毒的NP表位研究现状
        1.4.1 NP的表位研究现状
        1.4.2 保守表位的鉴定方法学
    1.5 本论文的研究意义及主要研究内容
第二章 材料与方法
    2.1 主要仪器
    2.2 主要耗材
    2.3 主要试剂与实验动物
    2.4 常用溶液和培养基的配制
    2.5 实验方法
        2.5.1 分子克隆及蛋白表达相关操作
        2.5.2 流感病毒的滴度测定
        2.5.3 流感病毒基因的获得和序列分析
        2.5.4 小鼠的免疫
        2.5.5 融合杂交瘤的制备与筛选
        2.5.6 杂交瘤细胞的培养
        2.5.7 单抗腹水的诱导
        2.5.8 单抗腹水的纯化
        2.5.9 血凝抑制试验(Hemagglutination Inhibition Assay,HI)
        2.5.10 酶联免疫吸附分析(ELISA)
        2.5.11 免疫渗滤法(Dot-ELISA)
        2.5.12 细胞免疫荧光实验
        2.5.13 NP单抗V区编码序列的测定
        2.5.14 分子模拟与对接
        2.5.15 重组蛋白的透射电镜观察
        2.5.16 分析型超速离心（沉降速度实验）
        2.5.17 流感病毒对小鼠的感染和组织采集
        2.5.18 HE染色分析
        2.5.19 免疫组化分析
第三章 结果与分析
    3.1 甲型流感病毒核蛋白单抗的分类
        3.1.1 甲型流感病毒进化分析及代表株的选择
        3.1.2 重组NP抗原的制备及性质鉴定
        3.1.3 甲型流感病毒核蛋白单抗库的分类
    3.2 NP保守线性表位的发现及应用
    3.3 NP保守性构象表位关键性氨基酸的发现及功能性研究
    3.4 人、禽宿主NP抗原性差异的关键位点的发现及应用
第四章 讨论
    4.1 甲型流感病毒NP的进化分析及表位鉴定
    4.2 NP的聚体形式分析
    4.3 人禽宿主差异诊断试剂的开发
    4.4 NP保守性表位鉴定、分析及应用
结论与展望
参考文献
致谢



本文编号：3883985