鸭SCD-1基因对子宫上皮细胞Ca 2+ 的效应及其启动子活性研究

发布时间：2024-01-30 02:36

　　硬脂酰辅酶A脱氢酶-1(stearosyl coenzyme A dehydrogenase-1,SCD-1)是调控肝细胞合成单不饱和脂肪酸的限速酶,对畜禽机体脂肪沉积有重要影响。Ca²⁺是机体不可或缺的重要离子,对机体各项生理功能具有重要调控作用,也是参与家禽蛋壳形成过程中最主要的成份,直接影响蛋壳质量。前人的研究结果表明,Ca²⁺浓度的变化能影响脂质的合成代谢。但有关畜禽Ca²⁺、脂质和调控脂质代谢相关基因的相互关系缺乏报道。因此,阐明家禽子宫上皮细胞中钙、脂质和SCD-1基因过表达之间的相关性,探讨家禽SCD-1基因影响子宫上皮细胞Ca²⁺分泌的调控作用,对提升家禽蛋壳品质有重要意义。为此,本研究开展鸭SCD-1基因对子宫上皮细胞Ca²⁺的调控效应及其启动子活性研究,取得如下结果:1.根据GenBank登录号(NW₀04677643.1)中SCD-1基因序列设计引物,扩增SCD-1基因启动子并直接测序,启动子软件分析结果显示:SCD-1基因启动子(位...

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摘要
Abstract
引言
第一章 文献综述
    1.1 SCD-1 基因概述
        1.1.1 SCD-1 基因的分子结构及其作用机理
        1.1.2 SCD-1 基因与代谢疾病
        1.1.3 SCD-1 基因与病毒性疾病
        1.1.4 SCD-1 基因对脂质代谢的调控作用
        1.1.5 SCD-1 启动子研究进展
    1.2 蛋壳主要成分及Ca²⁺的代谢调控
        1.2.1 蛋壳的主要成分
        1.2.2 Ca²⁺在子宫内的转运机制
        1.2.3 蛋壳形成机制
    1.3 Ca²⁺与脂质代谢关系研究进展
        1.3.1 Ca²⁺与脂质代谢的关系
        1.3.2 Ca²⁺与基因调控
        1.3.3 脂质代谢相关基因的调控
    1.4 研究目的与意义
第二章 SCD-1 基因启动子转录活性研究
    2.1 材料与方法
        2.1.1 试验样品
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 试验仪器
        2.1.4 配制试剂
        2.1.5 基因组DNA提取
        2.1.6 PCR扩增及真核表达载体构建
        2.1.7 细胞培养及启动子活性检测
        2.1.8 PUFA对启动子的效应
        2.1.9 SCD-1 基因启动子结构预测
        2.1.10 统计分析
    2.2 结果与分析
        2.2.1 鸭SCD-1 基因启动子生物信息学分析
        2.2.2 SCD-1 基因启动子真核表达载体的构建
        2.2.3 pEGFP-C1 转染PC3 细胞检测转染效率
        2.2.4 SCD-1 基因启动子活性检测
        2.2.5 PUFA对 SCD-1 基因启动子转录活性的调控
    2.3 讨论
第三章 鸭子宫上皮细胞的分离培养
    3.1 材料与方法
        3.1.1 试验动物
        3.1.2 试验试剂
        3.1.3 试验仪器
        3.1.4 试剂配制
        3.1.5 分离子宫上皮细胞
        3.1.6 子宫上皮细胞间接免疫荧光鉴定
    3.2 结果与分析
        3.2.1 子宫上皮细胞的初分离与活性鉴定
        3.2.2 鸭子宫上皮细胞形态学观察及鉴定
        3.2.3 鸭子宫上皮细胞间接免疫荧光鉴定
    3.3 讨论
第四章 SCD-1 基因过表达对鸭子宫上皮细胞钙离子和脂质的调控研究
    4.1 材料与方法
        4.1.1 试验动物
        4.1.2 购买的试验试剂
        4.1.3 试验仪器
        4.1.4 试剂配制
        4.1.5 鸭总RNA提取与c DNA合成
        4.1.6 扩增SCD-1 基因CDS区
        4.1.7 PCR扩增及pcDNA3.1(+)+SCD-1+Flag真核表达载体构建
        4.1.8 pcDNA3.1(+)-SCD-1-Flag真核表达载体转染子宫上皮细胞
        4.1.9 Fluo-3/AM荧光标记法测定子宫上皮细胞内钙Ca²⁺浓度
        4.1.10 鸭子宫上皮细胞脂质性状和鸭Flag标签表达量的测定
        4.1.11 统计方法
    4.2 结果与分析
        4.2.1 SCD-1 基因真核表达载体的构建
        4.2.2 Fluo-3/AM荧光标记法对鸭子宫上皮细胞内Ca²⁺染色效果
        4.2.3 pcDNA3.1(+)+SCD-1+Flag和 pEGFP-C1 共转染鸭子宫上皮细胞
        4.2.4 鸭SCD-1 基因过表达与子宫上皮细胞内Ca²⁺及脂质指标的关联性分析
    4.3 讨论
第五章 小结
    5.1 结论
    5.2 创新点
    5.3 下一步工作
参考文献
致谢
附录
    附录 Ⅰ 硕士研究生在读期间参与项目
    附录 Ⅱ 硕士研究生在读期间发表的论文
    附录 Ⅲ 硕士研究生在读期间获得的奖项



本文编号：3889331