关中奶山羊乳腺中G蛋白偶联受体30和表皮生长因子受体的表达及相关性研究

发布时间：2017-05-23 22:04

  本文关键词：关中奶山羊乳腺中G蛋白偶联受体30和表皮生长因子受体的表达及相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：已证实雌激素在哺乳动物妊娠、乳腺发育、泌乳启动与维持等方面发挥着重要的作用,雌激素的这些效应的发挥主要通过与其经典的核受体及膜受体结合而实现。G蛋白偶联受体30(G protein-coupled receptor 30,GPR30)作为一种新发现的雌激素膜受体,最先发现其与乳腺癌、卵巢癌等癌症的发生和发展密切相关,后续的研究证实它参与雌激素介导的诸多生殖生理功能的调节。研究发现GPR30在人和小鼠乳腺癌细胞中分布并促进和增强乳腺癌细胞的增殖活性,而GPR30在奶山羊等奶畜的乳腺组织中的形态学和功能方面的基础研究资料还未见报道。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)可促进乳腺细胞的增殖分化,并在GPR30介导雌激素的信号转导通路中发挥着重要的调节作用。因此,本试验分别采集妊娠初期、妊娠中期、妊娠后期以及泌乳初期、盛乳期、泌乳中期和泌乳后期的关中奶山羊乳腺组织,分别运用免疫组织化学和实时荧光定量PCR法对乳腺中GPR30与EGFR的分布和表达及相关性进行了研究。获得了以下研究结果:1妊娠期和泌乳期关中奶山羊乳腺中GPR30与EGFR的免疫组化定位与表达GPR30免疫反应阳性产物均分布于妊娠和泌乳各阶段奶山羊乳腺组织的腔上皮细胞与肌上皮细胞的细胞质与细胞膜;除妊娠初期和泌乳后期仅少量上皮细胞表现GPR30阳性染色外,其他各阶段的乳腺组织中几乎全部上皮细胞均有GPR30免疫阳性产物分布。乳腺中GPR30的相对表达量从妊娠初期到妊娠后期逐渐升高并达峰值,泌乳期则逐渐下降至泌乳后期的最低;GPR30的相对表达量在妊娠中期后半段极显著升高(P0.01),妊娠后期仍有升高但差异不显著(P0.05);泌乳初期GPR30的相对表达量显著低于妊娠后期(P0.05),而高于盛乳期(P0.05),其后表达水平极显著下降(P0.01)并降到最低水平。EGFR免疫反应阳性产物亦分布于妊娠和泌乳各阶段奶山羊乳腺组织的腔上皮细胞与肌上皮细胞的细胞质与细胞膜;泌乳中期和泌乳后期这2阶段只有部分上皮细胞有EGFR免疫染色,其他各阶段的乳腺组织中几乎全部上皮细胞均有EGFR免疫阳性产物分布。EGFR的表达水平表现为妊娠期时逐渐升高并在妊娠后期时达到峰值,泌乳期逐渐下降在泌乳后期降到最低;EGFR的相对表达量在妊娠后期与泌乳前期这2个阶段最高,且妊娠后期极显著高于泌乳前期(P0.01)。GPR30与EGFR的免疫组化结果的相关系数r=0.884,呈显著性正相关,即妊娠期和泌乳期各阶段GPR30和EGFR的相对表达量呈一致性的变化规律。2 GPR30 mRNA和EGFR mRNA的相对表达量检测RT-PCR结果显示GPR30 mRNA和EGFR mRNA的相对表达量与二者蛋白的表达趋势相似,同样均呈先升高再降低的表达趋势。GPR30 mRNA的相对表达量在妊娠后期和泌乳初期时最高且均极显著高于其他阶段(P0.01);而EGFR mRNA在妊娠后期、泌乳前期和盛乳期均有高表达且极显著高于其他阶段(P0.01),其中妊娠后期表达量最高但与泌乳前期差异不显著(P0.05),盛乳期极显著低于泌乳前期(P0.01)。GPR30 mRNA与EGFR mRNA相对表达量的相关系数r=0.835,呈显著性正相关,即妊娠期和泌乳期各阶段GPR30 mRNA与EGFR mRNA的相对表达量呈一致性的变化规律。以上结果表明,GPR30和EGFR主要分布于奶山羊乳腺的腔上皮和肌上皮细胞,其蛋白和mRNA的相对表达量随妊娠天数逐渐升至最高、随泌乳天数逐渐降低,且二者呈显著正相关,提示GPR30和EGFR共同参与了妊娠期和泌乳期奶山羊乳腺的生长发育和功能变化的调节。
【关键词】：奶山羊乳腺 G蛋白偶联受体30 表皮生长因子受体 免疫组织化学 实时荧光定量PCR
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S827
【目录】：

• 摘要5-7
• abstract7-12
• 文献综述12-19
• 第一章 雌激素受体与乳腺功能调节的研究进展12-19
• 1.1 雌激素对乳腺形态和功能的调节12-13
• 1.2 雌激素核受体在乳腺中的分布和功能13-14
• 1.2.1 乳腺中雌激素核受体ERα 和ERβ 的分布和功能13-14
• 1.2.2 乳腺中的其他雌激素核受体亚型14
• 1.3 雌激素膜受体在乳腺中的分布和功能14-16
• 1.3.1 雌激素膜受体GPR30信号通路15
• 1.3.2 GPR30在乳腺中的表达15-16
• 1.3.3 其他雌激素膜性受体16
• 1.4 其他与雌激素受体乳腺功能相关的受体16-18
• 1.4.1 EGFR在乳腺中的分布和功能16-17
• 1.4.2 其他乳腺发育调控因子17-18
• 1.5 结语18-19
• 试验研究19-30
• 第二章 奶山羊乳腺中GPR30与EGFR的表达及相关性研究19-30
• 2.1 材料与方法19-22
• 2.1.1 试验材料19-20
• 2.1.1.1 试验动物19
• 2.1.1.2 主要试剂和仪器19-20
• 2.1.2 试验方法20-22
• 2.1.2.1 取材及样本处理20
• 2.1.2.2 免疫组化法确定卵巢中GPR30、EGFR的表达20-21
• 2.1.2.3 qRT-PCR法检测奶山羊乳腺中GPR30 mRNA和EGFR mRNA的表达21-22
• 2.2 结果22-28
• 2.2.1 各时期奶山羊乳腺中GPR30免疫组化分布22
• 2.2.2 各时期奶山羊乳腺中EGFR免疫组化分布22-24
• 2.2.3 各时期奶山羊乳腺中GPR30和EGFR相对表达量分析24-25
• 2.2.4 各时期奶山羊乳腺中GPR30 mRNA和EGFR mRNA的表达量分析25-28
• 2.2.4.1 熔解曲线分析结果25-26
• 2.2.4.2 各时期奶山羊乳腺中GPR30 mRNA和EGFR mRNA的相对表达量26-28
• 2.3 讨论28-30
• 结论30-31
• 参考文献31-37
• 致谢37-38
• 作者简介38

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张伯钧,张洪芝,孙宏武,曲喜峰;绥棱县奶山羊改良情况调查[J];黑龙江动物繁殖;2000年03期

2 付吉青;如何养好奶山羊[J];吉林农业;2000年06期

3 巴特,白素文;怎样选择奶山羊[J];当代畜禽养殖业;2000年05期

4 ;奶山羊高产十招[J];当代畜禽养殖业;2000年06期

5 高文波;浅谈提高奶山羊产奶量的措施[J];辽宁畜牧兽医;2001年06期

6 李健民,方惠文,赵伶;我靠养奶山羊发了家[J];农村新技术;2001年06期

7 金江;提高奶山羊产奶量四要点[J];饲料博览;2001年04期

8 高文波;如何提高奶山羊的产奶量[J];新农业;2001年11期

9 王功胜;提高奶山羊产奶量的关键措施[J];农村百事通;2002年23期

10 张兆顺;奶山羊的管理技术[J];农村养殖技术;2002年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 白跃宇;谭旭信;;河南奶山羊培育技术[A];中国畜牧兽医学会养羊学分会全国养羊生产与学术研讨会议论文集[C];2010年

2 李芳娥;;奶山羊场、小区生产技术规范[A];《2011中国羊业进展》论文集[C];2011年

3 杨春珂;;奶山羊饲养配套技术[A];云南省首届无公害猪肉生产研讨会、云南省奶业发展对策研讨会论文集[C];2004年

4 罗军;;奶山羊良种繁育体系建设现状与思路[A];《2008中国羊业进展》论文集[C];2008年

5 张花菊;;莎能奶山羊改良本地山羊效果试验[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年

6 曹斌云;;养好奶山羊十要诀[A];《2009中国羊业进展》论文集[C];2009年

7 褚建刚;刘自建;郐明玉;;文登奶山羊品种选育报告[A];《2009中国羊业进展》论文集[C];2009年

8 魏志杰;;奶山羊规模养殖场生产经营管理体会[A];中国畜牧兽医学会养羊学分会全国养羊生产与学术研讨会议论文集[C];2010年

9 乔文丽;褚建刚;郐明玉;崔军明;;文登奶山羊良种繁育产业化技术体系研究报告[A];2010中国羊业进展[C];2010年

10 彭燕;;奶山羊精液冷冻保存试验[A];《2011中国羊业进展》论文集[C];2011年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 谢红江;千阳莎能奶山羊全国走俏[N];宝鸡日报;2006年

2 陕西省千阳县委宣传部 谢红江;把奶山羊做成大产业[N];中国畜牧兽医报;2007年

3 钟石;陕西做大做强奶山羊产业[N];中国畜牧兽医报;2007年

4 郑综文 元莉华;做好规划 加快关中奶山羊产业发展[N];中国畜牧兽医报;2007年

5 省农业厅厅长 梁凤民;重新认识奶山羊产业 把朝阳产业做大做强[N];陕西日报;2007年

6 郑综文邋记者 元莉华;把奶山羊发展成关中畜牧业的主导产业[N];陕西日报;2007年

7 高东风邋通讯员 周焕;3年建设120个奶山羊服务站[N];渭南日报;2007年

8 李尔平 张钊 记者 程娟;三原奶山羊产业发展势头强劲[N];咸阳日报;2007年

9 葛伟刚;淳化莎能奶山羊助农发『羊财』[N];咸阳日报;2007年

10 殷际辉 陈沛强;富平奶山羊欲与奶牛试比“高”[N];中国特产报;2008年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 李香子;丙酸前体与亚麻酸对奶山羊瘤胃发酵与乳脂共轭亚油酸形成机理研究[D];中国农业科学院;2014年

2 王维;奶山羊扩繁技术、XY精子分选及Y染色体ZNF280BY基因拷贝数变异研究[D];西北农林科技大学;2015年

3 张强;体细胞核移植技术制备转GH基因奶山羊的研究[D];南京农业大学;2014年

4 宋玉洁;人乳铁蛋白基因定点敲入β乳球蛋白位点基因打靶奶山羊的研制[D];西北农林科技大学;2015年

5 郑丽明;Tet1对奶山羊雄性生殖干细胞自我更新与增殖的表观修饰调控[D];西北农林科技大学;2016年

6 侯金星;奶山羊产奶性状候选基因的筛选及其多基因聚合效应的研究[D];西北农林科技大学;2013年

7 朱广琴;多羔和单羔奶山羊发情期卵巢组织差异表达基因的筛选、鉴定及分析[D];西北农林科技大学;2011年

8 尹多;核移植介导生产转基因延边奶山羊供核细胞体系的研究[D];延边大学;2013年

9 李术;奶山羊氟病毒理学的研究[D];东北农业大学;2001年

10 丁武;波尔山羊与关中奶山羊杂交后代产肉性能及羊肉品质研究[D];西北农林科技大学;2005年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 唐琳;妊娠期奶山羊黄体中褪黑素膜受体MT1和MT2的分布和表达[D];西北农林科技大学;2015年

2 宋爱爱;奶山羊均衡产奶配套技术研究与应用（Ⅰ）[D];西北农林科技大学;2015年

3 高特仰;miRNA-1296 和miRNA-370对奶山羊MTHFR基因表达的调控作用研究[D];西北农林科技大学;2015年

4 郭晓盼;富平县奶山羊产业发展状况及技术研究分析[D];东北农业大学;2015年

5 张桂芳;不同精粗比日粮对泌乳期奶山羊肝脏氨基酸和葡萄糖代谢的影响[D];南京农业大学;2014年

6 张小刚;海藻糖对奶山羊睾丸组织冷冻保存效果的影响[D];西北农林科技大学;2016年

7 于得水;关中奶山羊乳腺中G蛋白偶联受体30和表皮生长因子受体的表达及相关性研究[D];西北农林科技大学;2016年

8 肖井超;萨能奶山羊精液的品质检测及低温液态保存效果的研究[D];西北农林科技大学;2016年

9 刘晓瑞;miR-449a对LGR4在奶山羊子宫内膜基质细胞中靶向调控作用的研究[D];西北农林科技大学;2016年

10 武思宇;深度测序法筛选和鉴定维持奶山羊雄性生殖干细胞自我更新的关键因子[D];西北农林科技大学;2016年

  本文关键词：关中奶山羊乳腺中G蛋白偶联受体30和表皮生长因子受体的表达及相关性研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：389182