海南黑山羊六种疫病的血清学调查及两种病原菌的分离鉴定

发布时间：2024-02-29 05:59

　　多种山羊流行病的发生一直困扰着海南黑山羊产业的发展。本研究首先对海南黑山羊6种疫病进行血清学调查,包括:副结核、羊口疮、布鲁氏菌病、魏氏梭菌病、传染性胸膜肺炎和巴氏杆菌病。研究方法主要应用ELISA检测。结果表明,在海南黑山羊中存在副结核、羊口疮、魏氏梭菌病、传染性胸膜肺炎和巴氏杆菌病,但未检测出布鲁氏菌病存在。本研究根据临床症状,利用分离培养、生化鉴定和分子生物学方法,成功分离并鉴定出D型多杀性巴氏杆菌和类鼻疽伯克霍尔德氏菌海南株。本研究对多杀性巴氏杆菌菌株进行药敏实验,发现其对甲氧苄啶一磺胺甲恶唑、左氧氟沙星、四环素、庆大霉素和阿莫西林敏感,对头孢他啶、红霉素中度敏感,对氟苯尼考耐药。最后,基于类鼻疽伯克霍尔德氏菌的致病性强及对大多数抗菌药物耐药特点,本研究提取了该菌的全基因组,利用Illumina Hiseq 4000平台结合Pacbio RSII平台的测序手段,成功获得羊源类鼻疽伯克霍尔德氏菌海南株的细菌全基因组,并对基因组进行功能注释、抗性基因分析及毒力基因分析,这为国内类鼻疽伯克霍尔德氏菌标准菌株的建立、早日研发有效的疫苗提供基因组信息支持。

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１各种测序平台的读长（Ｌｅｖｙ?ａｎｄ?Ｍｙｅｒｓ?２０１６）??Ｆｉｇ．ｌ?Ｒｅａｄｉｎｇ?ｌｅｎｇｔｈ?ｆｏｒ?ｍｕｌｔｉｐｌｅ?ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ?ｐｌａｔｆｏｒｍｓ（Ｌｅｖｙ?ａｎｄ?Ｍｙｅｒｓ?２０１６）??

器运行时间，预测样品制备时间，样品制备成本以及平台偏差或错误模式）的不??同，需要大量的思考和研宄。目前，两个最基础、最常用的指标是在仪器运行中??产生的读长的数量和这些读长的长度（图１）?（Ｌｅｖｙ?ｅｔａｌ．，?２０１６）。??７??

图１分离菌株的革兰氏染色??Ｆｉｇ．ｌ?Ｇｒａｍ?ｓｔａｉｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｓｔｒａｉｎ??

２．１分离菌株的革兰氏染色结果??在显微镜下（１０００Ｘ）观察菌株形态，分离菌株为革兰氏阴性菌，呈球杆状，??见图１。??２２??

图３多杀性巴氏杆菌分型结果??Ｍｌ：ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤ２０００；ｌ：Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｆ?分型引物，但未加模板扩增结果；２：Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、??

２．４多杀性巴氏杆菌分型及毒力基因检测结果??对分离得到的多杀性巴氏杆菌菌株进行分型鉴定，其结果显示：??分离得到的菌株属于Ｄ型（图３）。??ｂｐ?．Ｍｌ?１?２?３??■??２０００??１０００?：ｔｉ??７５０?１?Ｉ??２５０?Ｔ??图３多杀性巴氏杆菌分型结果??Ｍｌ：ＤＮ....

图２?１６ｓ?ｒＲＮＡ扩增结果??Ｍｌ：ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤ２０００；ｌ：１６ＳｒＲＮＡ?扩增产物??

２．３细菌１６ＳｒＲＮＡ鉴定结果??提取分离的菌株的全基因组，利用１６ＳｒＲＮＡ通用引物，进行特异性基因序??列的扩增，得到１，４６５?ｂｐ大小的ＰＣＲ产物（图２），经测序后，将其序列结果进??行ＢＬＡＳＴ发现，该菌株属于多杀性巴氏杆菌。??２３??

本文编号：3914604