猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30毒株的分离鉴定、全基因序列测定及分析

发布时间：2024-03-23 05:30

　　本研究旨在对类NADC30毒株进行病毒分离和全基因组测序,了解类NADC30毒株的分子特征和遗传进化情况,对类NADC30毒株进行深入的研究。同时对河南及周边地区流行的PRRSV毒株的ORF5及nsp2的基因变异情况进行检测,揭示PRRSV毒株的最新流行动态,以期为临床诊断、新疫苗的研发及抗病毒药物的研发提供科学的参考依据。一、PRRSV分型PCR方法的建立为了更快捷准确地对类NADC30毒株进行检测,本实验针对PRRSV类NADC30毒株、HP-PRRSV毒株、经典PRRSV毒株在nsp2区域分别缺失131个氨基酸、30个氨基酸无缺失这一分子特征,设计一对引物建立PCR方法对这3类毒株进行分型。本实验完成该RT-PCR方法的建立,及敏感性和特异性的验证,并对临床样品进行检测。实验结果证明:该方法能够同时将经典PRRSV毒株、HP-PRRSV毒株以及类NADC30毒株这三种类型的毒株进行区分,并具有良好的敏感性和特异性。二、对2016-2017年河南省及周边地区的PRRSV的分子检测,及ORF5、nsp2基因的变异分析本研究对756份临床样品进行RT-PCR检测,共检出阳性样品139份...

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1PRRSV粒子示意图

内部含有病毒核酸[17]。病毒粒子在pH6.5或大于pH7.5的条件下则会丧失感染力[18-19]。PRRS敏感，在56℃放置45min或者37℃条件下放置48h长期保存，可在-70℃保存一年左右，并表现出良好对乙醚和氯仿等脂溶剂比较敏感，其在氯化铯和蔗糖.14....

图1-2PRRSV的基因组结构

亚基因组mRNAs来进行的。ORF2a、ORF2b、ORF3、ORF4、ORF5、ORF5、ORF6、ORF7依次编码病毒的结构蛋白GP2a、E、GP3、GP4、GP5、GP5a、M、N。GP2-GP5是PRRSV的糖基化结构蛋白，M和N是病毒的非糖基化结构蛋白，....

图2-1RT-PCR检测结果

类NADC30毒株HNjz15、VR2332株、JXA1株的后进行10倍系列稀释后PCR扩增，检测其敏感性NADC30、HP-PRRSV和经典毒株的RT-PCR临床阳性样品通过设计的引物进行PRRSV分型检测，并行比对，验证该引物是否可用于临床样品检....

图2-2RT-PCR鉴别检测方法的特异性试验结果??

CR产物经过切胶、回收、连接转化、挑菌鉴定之后送金唯智公R2332分别能扩增出681bp、984bp、1074bp的片段，测序的结致，说明扩增的结果与对应的毒株相吻合。别检测方法的特异性实验结果对PRRSVVR2332株、JXA1株、HNjz15株以及PEDV....

本文编号：3935530