DNA甲基化酶抑制剂5-Aza-CdR对德保黑猪手工克隆胚胎体外发育潜能影响的初步研究

发布时间：2024-04-02 03:57

　　在动物的体细胞克隆过程中,重编程不完全是阻碍克隆胚胎发育的主要原因。为降低克隆胚胎DNA甲基化水平,提高克隆胚胎的重编程效率,建立优化广西德保黑猪手工克隆(pig-HMC)技术体系,本研究应用DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理广西德保黑猪成纤维细胞细胞以及手工克隆重构胚,并对供体细胞增殖和染色体倍性等进行检测分析,胚胎发育率的统计分析,并对处理后胚胎甲基化等相关基因表达模式进行了分析。 1.探讨了5-Aza-CdR处理德保黑猪耳成纤维细胞的适宜浓度.本研究采用不同浓度(0μmol·L-1、0.25μmol·L-1、0.5μmol·L-1和1μmol·L-1)5-Aza-CdR处德保黑猪耳成纤维细胞,发现0.25μmol·L-1处理组细胞生长曲线最相近于对照组,且各处理组细胞生长曲线均呈“S”型。随着5-Aza-CdR浓度增加,细胞均有不同程度的畸变、生长抑制甚至致死。在0μmol·L-1～0.5μmol·L-1处理浓度范围内,5-Aza-CdR处理对德保黑猪成纤维细胞的处理不会显著改变其细胞染色体整倍...

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1 哺乳动物体细胞核移植研究进展
        1.1 传统核移植的研究进展
        1.2 手工克隆的研究进展
        1.3 手工克隆无透明带培养系统的研究进展
    2 哺乳动物的表观遗传修饰
        2.1 DNA甲基化
        2.2 组蛋白修饰
        2.3 基因组印记
        2.4 X染色体失活
    3 体细胞核移植与重编程的关系
    4 DNA甲基化与胚胎发育的关系
    5 去甲基化酶与多能基因
    6 5-Aza-cdR与DNA甲基化
    7 研究意义和目的
第二章 5-AzA-CdR处理对德保黑猪耳成纤维细胞的影响
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 试验材料
        1.2 主要设备仪器与耗材
        1.3 主要试剂及制备
        1.4 试验方法
        1.5 试验设计
        1.6 统计分析
    2 结果与分析
        2.1 不同浓度5-Aza-CdR处理对德保黑猪成纤维细胞生长曲线的影响
        2.2 不同浓度5-Aza-CdR处理德保黑猪成纤维对细胞生长形态的影响
        2.3 不同浓度5-Aza-CdR处理对德保黑猪耳成纤维细胞染色体倍性的影响
        2.4 不同浓度5-Aza-CdR处理对德保黑猪耳成纤维细胞相关基因表达的影响
    3 讨论
    4 小结
第三章 5-Aza-CdR对德保黑猪HMC胚胎体外发育的影响
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 试验材料
        1.2 主要设备仪器与耗材
        1.3 主要试剂及制备
        1.4 试验方法
        1.5 试验设计
        1.6 数据统计分析
    2 结果与分析
        2.1 不同浓度的5-Aza-CdR处理德保黑猪耳成纤维细胞对pig-HMC胚胎体外发育的影响
        2.2 不同浓度的5-AzA-CdR处理重构胚对pig-HMC胚胎体外发育的影响
        2.3 5-AzA-CdR不同时间处理重构胚对pig-HMC胚胎体外发育的影响
        2.4 5-AzA-CdR同时处理供体和重构胚对pig-HMC胚胎体外发育的影响
    3 讨论
    4 小结
第四章 5-Aza-CdR处理后手工克隆胚胎表观遗传修饰相关基因表达的定量变化分析
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 试验材料
        1.2 主要设备仪器与耗材
        1.3 主要试剂及制备
        1.4 试验方法
        1.5 试验设计
        1.6 统计分析
    2 结果与分析
        2.1 Tet2与5mC的动态变化关系
        2.2 5-Aza-CdR处理对Dnmt1在胚胎发育过程中表达情况的影响
        2.3 5-Aza-CdR处理对Tet1在胚胎发育过程中表达情况的影响
        2.4 5-Aza-CdR处理对Tet2在胚胎发育过程中表达情况的影响
        2.5 5-Aza-CdR处理对Tet3在胚胎发育过程中表达情况的影响
        2.6 5-Aza-CdR处理对Oct4在胚胎发育过程中表达情况的影响
        2.7 5-Aza-CdR处理对Nanog在胚胎发育过程中表达情况的影响
    3. 讨论
        3.1 Dnmt1表达变化对胚胎发育的影响
        3.2 Tets和多能性基因Oct4、Nanog的表达变化对胚胎发育的影响
    4. 小结
结论
参考文献
英文缩略词
附图
致谢
攻读学位期间发表论文情况



本文编号：3945779